背景:结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是常见的消化道恶性肿瘤之一,每年全球新增120万例结直肠癌案例,而一半死于该疾病。手术、放疗和化疗三大传统疗法治愈率低且存在严重的毒副作用,免疫治疗越来越受到重视,并取得了肿瘤治疗的一些重大突破。在免疫治疗中,肿瘤疫苗因具有耐受性好、低毒性和易于注射等优点而受到专门研究,但也存在疫苗免疫原性低、肿瘤异质性、肿瘤免疫逃避及抑制性肿瘤微环境等问题,使其尚未获得显著的临床益处,这就亟需研制出一种治疗效果好且无毒副作用的肿瘤疫苗。本研究利用化学生物学方法,尝试将广谱CT26.WT小鼠结直肠癌细胞抗原与特定吞噬受体的配体交联,进而将交联复合物制备成肿瘤疫苗。试图通过观察接种疫苗的小鼠的结直肠癌移植瘤的生长情况和存活时间来评估其有效性。方法:首先,通过非天然糖代谢掺入对培养的CT26.WT细胞抗原进行标记,使糖基化肿瘤抗原携带叠氮化的唾液酸,利用流式细胞术和免疫荧光技术确定代谢掺入的最优条件参数。其次,利用生物正交反应使肿瘤抗原叠氮修饰位点再进一步共价缀合生物素,通过Western Blot和免疫荧光技术检测肿瘤抗原的生物素化情况。然后,利用抗原-抗体结合原理,将小鼠anti-Biotin单抗（Ig G1亚型,其Fc结构域是Ig G1Fc R的配体）与生物素化肿瘤抗原交联形成免疫复合物,通过Western Blot判断最优交联参数。最后,免疫复合物与弗氏佐剂混合制备成肿瘤疫苗,对雄性BALB/c小鼠背部皮下（尾静脉）和腹腔注射进行免疫,对照组小鼠以同样的方式注射等量的生物素化抗原、未经修饰的抗原或BSA。三次免疫后,将CT26.WT肿瘤细胞接种于小鼠背部右后侧建立皮下移植瘤模型。成瘤后,观察记录移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积和相对肿瘤增值率以及小鼠存活时间。此外,建立小鼠结直肠癌移植瘤模型。成瘤后,瘤内注射TLR7激动剂Resiquimod和anti-OX40单抗,对照组小鼠以同样的方式注射等量的anti-OX40单抗或PBS,观察记录移植瘤的生长情况。结果:流式细胞术和免疫荧光技术结果表明唾液酸前体物代谢掺入能高效地使肿瘤细胞发生叠氮化修饰,最优浓度是2 m M、最优时间是24 h。Western Blot结果表明,正交基团修饰的生物素通过生物正交反应使叠氮化肿瘤抗原发生生物素化;生物素化肿瘤抗原能高效地与anti-Biotin抗体形成复合物,二者交联的最佳比例（w/w）是200/8。以广谱CT26.WT细胞抗原作为免疫原免疫BALB/c小鼠,各实验动物接种肿瘤细胞后均有成瘤,但在肿瘤生长初期,实验组有20%～30%的小鼠移植瘤生长速率较其它组缓慢,其它组小鼠没有显著差异。随着接种时间的延长,所有小鼠移植瘤体积逐渐变大。到后期,相对肿瘤增值率增加更加显著,但显著延长了实验组70%小鼠的存活时间。瘤内注射Resiquimod和anti-Biotin抗体可暂时延缓移植瘤的生长。结论:本研究通过化学生物学手段实现了广谱CT26.WT肿瘤抗原与特定吞噬受体的配体的交联。以交联复合物单独对小鼠进行预防性免疫未能有效地抑制移植瘤的生长。我们的结果提示,仅仅依靠改变肿瘤抗原递送途径可能难以达到有效抑制肿瘤生长的目的。但是,这种可能的新型肿瘤疫苗对受免机体的抗肿瘤免疫应答的影响需要进一步评估。