乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是调节动物体液内自由铁水平的转铁蛋白族中最重要的成员。它是一种分泌性蛋白,广泛存在于哺乳动物的乳汁、动物体的泪液、唾液、汗液、胆汁、精液,气管和鼻腔分泌物以及胰液、血浆、羊水、小肠液、滑膜液和嗜中性粒白细胞中。 为了研究不同个体或组织的hLF的碱基及氨基酸序列是否存在差异和进一步探讨该基因的异源表达特性,从正常人外周血液中分离中性粒白细胞(WBC),提取总RNA;以Oligo(dT)为引物合成第1条cDNA链,将LF基因分成1.5和0.8kb 2个cDNA片段进行扩增,分别获得预期的cDNA片段,将其插入pMD18-T载体中,得到2种重组质粒,经鉴定后再将2个cDNA片段切下来,与巴氏毕赤酵母表达载体pPICZα-A相连,获得含有完整LF基因的重组表达质粒pPICZα-hLF。对所克隆到的hLF cDNA序列进行测定,结果表明,其cDNA全长为2,136bp,编码711个氨基酸残基。DNA序列与登录的来自人不同组织的hLF序列进行比对,结果表明,碱基同源性达99%,有21个碱基发生了变化,其中有7个碱基变异不导致氨基酸的改变;氨基酸同源性为96～97%。 利用Vector NTI、DNAMAN和DNA Tools等生物软件对hLF进行生物信息学分析。分析结果表明:(1)hLF的二级结构以α螺旋和β-折叠为主,二者沿蛋白质的氨基酸顺序交替排列,且α-螺旋大大多于β-折叠;(2)三级结构在二级结构的基础上折叠成2个基本相等的叶,每个叶进一步形成2个结构域和