由于环境和饲料的变化,新生仔猪断奶后容易出现免疫力低下和肠道屏障损伤的现象。产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）是引起该阶段仔猪生病的主要病原体。黑水虻虫粉因其高营养价值和免疫调节作用而广泛应用于畜禽生产,其可通过改变细菌组成及其代谢产物来增强育肥猪结肠黏膜的免疫稳态。然而,关于黑水虻虫粉对仔猪断奶过程保护机制的研究报道较少,特别是对致病菌入侵下断奶仔猪的保护机制。因此,本文使用ETEC K88菌株感染断奶仔猪,探究前期饲料中添加不同剂量的黑水虻虫粉对ETEC K88感染仔猪的保护作用和具体机制。本实验共选取12头断奶仔猪,初始平均体重为7.68?0.26 kg,随机分为3组,每组4头猪。实验分组为3个处理组,分别是C组（ETEC K88感染）、T1组（4%黑水虻虫粉+ETEC K88感染）和T2组（8%黑水虻虫粉+ETEC K88感染）。仔猪饲料中分别添加0%、4%和8%的黑水虻虫粉（C组、T1组、T2组）饲喂28天,在第29天使用灌胃导管将ETEC K88(5×1010 CFU/m L)灌入仔猪体内,第32天进行仔猪前腔静脉采血,用于代谢物检测。取回肠组织一部分放入4%的甲醛溶液中,用于后续制作切片;另一部分刮取肠黏膜进行相关蛋白检测。研究结果表明,同样在ETEC K88感染的情况下,添加黑水虻虫粉的两组仔猪血清中免疫球蛋白Ig A和Ig G的水平显著升高,且回肠发育形态更完整、紧密连接蛋白表达量更高、促炎因子水平和细胞凋亡百分比均显著下降。因此,黑水虻虫粉的添加增强了仔猪的免疫性能并且抑制了ETEC K88感染下仔猪回肠上皮细胞的凋亡和炎症反应的发生。血清代谢组学分析发现,代谢物柠檬酸（Citric acid,CA）与黑水虻虫粉的添加剂量呈显著正相关。研究结果表明,CA可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）分泌BAFF、IL-10等与B淋巴细胞活化有关细胞因子,提高小鼠脾脏中CD138+CD19+细胞中Ig G+、Ig A+细胞的比例。因此,黑水虻虫粉的添加可有效提高血清中CA的含量,发挥免疫调节作用,该结果也与黑水虻虫粉添加后仔猪血清中Ig A和Ig G的升高一致。进一步研究表明CA可以抑制猪回肠上皮细胞（IPI-2I）中的炎症反应和细胞凋亡,在ETEC K88感染的小鼠模型中也得到了相似的结果。因此,CA在维持肠道屏障的完整性中发挥重要作用,充分解释了黑水虻虫粉添加后保护仔猪肠道屏障免受ETEC K88损伤的原因。粪便16S测序结果和血清代谢组学联合分析发现,CA的含量与肠道菌Massilia呈显著正相关。我们发现Massilia的发酵产物中含有大量的CA。这提示我们,仔猪体内CA的增多可能与肠道菌Massilia有关。综上所述,黑水虻虫粉对ETEC K88诱导仔猪肠道屏障损伤的保护作用主要通过有效提高血清中CA的含量,CA可促进B淋巴细胞分化、抑制炎症反应并具有抗上皮细胞凋亡特性。该结果为仔猪感染其他致病性微生物所致疾病的治疗提供了新的思路。