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目的:探讨山慈菇含药血清对人乳腺癌SK-BR-3细胞在恶性生物学表型方面的影响(增殖、凋亡、迁移、周期)及初步的分子机制研究。
材料与方法:人乳腺癌SK-BR-3细胞.山慈菇水煎液.20只SD雌性大鼠。方法:(1)随机数表法选择20只SD雌性大鼠分为实验组和对照组,每组10只,实验组大鼠灌0.25g/ml山慈菇浓煎剂,对照组大鼠灌胃等剂量生理盐水,每日早晚两次,连续6天末次给药后腹主动脉取血,制作含药血清(2)MTT试验使用山慈菇含药血清随倍比稀释药物浓度及作用时间差别观察对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖情况的影响(3)倒置显微镜观察SK-BR-3细胞形态(4)荧光显微镜观察SK-BR-3细胞凋亡(5)划痕实验观察SK-BR-3细胞迁移能力(6)PI单染法观察SK-BR-3细胞增殖周期(7)免疫印迹法(Western-Blot)检测SK-BR-3细胞p53、bcl-2蛋白表达的影响。
结果:
1.根据MTT实验,山慈菇含药血清对人乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖有抑制作用并呈时间浓度依赖性,同一浓度情况下,48h时细胞抑制率明显高于24h时间点,在15%含药血清处出现拐点为最佳剂量状态并有统计学意义(P<0.05)。
2.倒置显微镜下观察细胞形态,随剂量增加,细胞间距越松散,漂浮细胞越多。
3.荧光显微镜下,高、中、低剂量组较对照组均有不同程度的细胞核形态改变和蓝白色荧光,证明不同剂量组山慈菇含药血清能够引起SK-BR-3细胞不同程度凋亡。
4.通过划痕实验显示,实验组较对照组均不同程度地明显延缓人乳腺癌SK-BR-3细胞向中心聚集。
5.通过PI单染法观察凋亡周期发现实验组的G1期DNA含量随剂量增加而增多,G1期细胞长时间阻滞引起凋亡,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05),所以山慈菇含药血清可能通过G1期阻滞引起SK-BR-3细胞凋亡。
6.免疫印迹法(Western-blot)检测结果提示与对照组相比,不同浓度含药血清作用48h后bcl-2(凋亡抑制基因)蛋白表达量,呈现随药物浓度增加而减少的趋势,P<0.05;而P53蛋白表达量,呈现随着药物浓度增加而增加的趋势,P<0.05。
结论:
1.山慈菇含药血清能够有效抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞活性,并加速细胞凋亡以及延缓细胞的迁移能力。
2.初步的机制研究表明,SK-BR-3细胞中p53蛋白过表达,而bcl-2蛋白表达下降,说明山慈菇含药血清诱导SK-BR-3细胞分化、凋亡机制可能是通过影响抑癌基因和癌基因表达而实现的。提示山慈菇含药血清对her-2阳性乳腺癌的治疗具有潜在的治疗价值。
材料与方法:人乳腺癌SK-BR-3细胞.山慈菇水煎液.20只SD雌性大鼠。方法:(1)随机数表法选择20只SD雌性大鼠分为实验组和对照组,每组10只,实验组大鼠灌0.25g/ml山慈菇浓煎剂,对照组大鼠灌胃等剂量生理盐水,每日早晚两次,连续6天末次给药后腹主动脉取血,制作含药血清(2)MTT试验使用山慈菇含药血清随倍比稀释药物浓度及作用时间差别观察对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖情况的影响(3)倒置显微镜观察SK-BR-3细胞形态(4)荧光显微镜观察SK-BR-3细胞凋亡(5)划痕实验观察SK-BR-3细胞迁移能力(6)PI单染法观察SK-BR-3细胞增殖周期(7)免疫印迹法(Western-Blot)检测SK-BR-3细胞p53、bcl-2蛋白表达的影响。
结果:
1.根据MTT实验,山慈菇含药血清对人乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖有抑制作用并呈时间浓度依赖性,同一浓度情况下,48h时细胞抑制率明显高于24h时间点,在15%含药血清处出现拐点为最佳剂量状态并有统计学意义(P<0.05)。
2.倒置显微镜下观察细胞形态,随剂量增加,细胞间距越松散,漂浮细胞越多。
3.荧光显微镜下,高、中、低剂量组较对照组均有不同程度的细胞核形态改变和蓝白色荧光,证明不同剂量组山慈菇含药血清能够引起SK-BR-3细胞不同程度凋亡。
4.通过划痕实验显示,实验组较对照组均不同程度地明显延缓人乳腺癌SK-BR-3细胞向中心聚集。
5.通过PI单染法观察凋亡周期发现实验组的G1期DNA含量随剂量增加而增多,G1期细胞长时间阻滞引起凋亡,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05),所以山慈菇含药血清可能通过G1期阻滞引起SK-BR-3细胞凋亡。
6.免疫印迹法(Western-blot)检测结果提示与对照组相比,不同浓度含药血清作用48h后bcl-2(凋亡抑制基因)蛋白表达量,呈现随药物浓度增加而减少的趋势,P<0.05;而P53蛋白表达量,呈现随着药物浓度增加而增加的趋势,P<0.05。
结论:
1.山慈菇含药血清能够有效抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞活性,并加速细胞凋亡以及延缓细胞的迁移能力。
2.初步的机制研究表明,SK-BR-3细胞中p53蛋白过表达,而bcl-2蛋白表达下降,说明山慈菇含药血清诱导SK-BR-3细胞分化、凋亡机制可能是通过影响抑癌基因和癌基因表达而实现的。提示山慈菇含药血清对her-2阳性乳腺癌的治疗具有潜在的治疗价值。