金鱼SG2NA和Striatin基因的分子克隆及其发育表达分析

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以金鱼为模式动物,应用RT—PCR结合RACE,从金鱼脑组织克隆了SG2NA和Striatin基因cDNA全长。序列分析显示,金鱼中SG2NA和Striatin基因与人类等其它物种,有着很高的相似性,并且存在相同的功能基序。分析此两基因的序列及后续实验时,发现,在金鱼中,两基因mRNA均存在全新的选择性剪接变体形式,分别为30bp和27bp的核苷酸序列可变剪接所致,由此造成了10aa和9aa的氨基酸序列的丢失或改变。对此两剪接区域的初步分析发现,可变剪接可能造成了磷酸化位点的丢失,和蛋白激酶或磷酸酶绑定位点的改变。此两变体形式的存在,或构成了一种重要的功能调控机制。 随后,应用RT—PCR和Western blotting方法,初步分析了在金鱼成体不同组织、胚胎发育不同时期,以及金鱼和小鼠眼睛四组织中,SG2NA的表达模式。发现,无论是在mRNA水平还是在蛋白质水平,成体各组织及胚胎发育不同时期间的表达均存在不同程度的差异,特别是伴随胚胎发育的进程,SG2NA在蛋白水平和mRNA水平都有很大的波动,预示其在胚胎发育过程中受到了严格的调控。结合Striatin家族低等生物中同源基因的已报道功能,推测,其可能在金鱼的胚胎发育及组织分化的过程中起重要作用。在金鱼和小鼠眼睛四组织的表达中,其组织间存在的较大差异,可能与眼组织细胞分化及参与特定细胞的功能相关。同时,金鱼和小鼠间存在的物种差异,推测是该基因家族在物种进化过程中,对于基因功能的差异选择中形成的。此外,在培养的人癌和眼睛神经细胞系中,对此两基因的表达也做了初步检测,为进一步深入研究该基因家族的功能奠定了基础。 综上,通过本研究,我们报道了,SG2NA和Striatin在金鱼中存在的两个全新变体形式,重点分析了SG2NA基因在金鱼中的组织表达分布和胚胎发育进程中的表达变化特点,并通过金鱼和小鼠,建立了该基因的眼组织表达模式。这些都为我们下一步深入研究Striatin家族的功能,特别是在发育过程中的功能,奠定了坚实的基础,也为进一步的功能机制探索提供了条件。
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