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第一部分 p57kip2、cyclin D1在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义 目的：通过检测子宫内膜不同病变组织中p57kip2、cyclin D1蛋白的表达，探讨其在人子宫内膜样腺癌（endometrioid adenocarcinoma，EA）中的意义。 方法：选取EA100例、子宫内膜样上皮内肿瘤（endometrioid intraepithelial neoplasia，EIN）20例、子宫内膜增生不伴非典型性20例、增生期子宫内膜组织20例。应用免疫组化EliVision法检测子宫内膜不同病变组织中p57kip2、cyclin D1蛋白的表达。 结果：p57kip2蛋白在EIN组织中表达最高，在增生期子宫内膜、EA、子宫内膜增生不伴非典型性组织中表达逐渐降低，子宫内膜增生不伴非典型性组织与 EIN组织中p57kip2蛋白表达差异有统计学意义（P﹤0.05）。cyclinD1蛋白在EA组织中表达最高，在增生期子宫内膜组织中表达最低，在子宫内膜增生不伴非典型性组织、EIN组织中表达依次增高，差异均有显著性（P﹤0.01）。p57kip2、cyclin D1蛋白在EA组织中的表达随着组织学分级的增高呈依次递减趋势，但仅p57kip2蛋白表达和组织学分级有关（P﹤0.05）。 结论:EA中cyclin D1表达明显高于增生期子宫内膜组织，提示cyclin D1可能协同异常合成的p57kip2参与了EA的形成。联合检测p57kip2、cyclin D1在EA中的表达，对EA的早期诊断与治疗有重要指导意义。 第二部分 p57kip2、cyclin D1在子宫内膜癌细胞中的表达及意义 （一）p57kip2、cyclin D1在不同子宫内膜细胞中的表达及意义 目的：通过检测不同子宫内膜细胞中p57kip2、cyclin D1蛋白的表达，探讨其在子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中的意义。 方法：选取不同子宫内膜细胞[高分化EC细胞（Ishikawa）、中分化EC细胞（JEC）及正常子宫内膜细胞（ESC）]进行细胞培养。用细胞计数法绘制细胞的生长曲线，选取对数增长期细胞进行实验:用MTT法检测不同子宫内膜细胞的增长情况；流式细胞术法（flow cytometry，FCM)检测不同子宫内膜细胞的周期分布情况；免疫蛋白印迹法（Western blot，WB）检测p57kip2、cyclin D1蛋白在不同子宫内膜细胞中的表达。 结果：①生长曲线显示：Ishikawa、JEC、ESC细胞在传代后第3天进入对数增长期，第7天进入平台期，Ishikawa、ESC在第8天，JEC在第9天开始进入衰退期。②MTT观察细胞生长情况：连续8天检测 Ishikawa、JEC、ESC细胞的OD值结果显示，JEC>Ishikawa>ESC。第1、2、4、5天JEC的OD值与ESC、Ishikawa比较，第2、4、7、8天Ishikawa的OD值与ESC比较，有统计学意义（P﹤0.05）。③FCM分析细胞周期：在G0/G1期中细胞数最多的是JEC，最少的是Ishikawa，在S期中细胞数最多的是Ishikawa，最少的是JEC，在G0/G1期和S期ESC与Ishikawa、JEC比较，Ishikawa与JEC比较，均有统计学（P<0.05）；在G2/M期中细胞数最多的是JEC，最少的是ESC，但仅在 ESC与 Ishikawa、JEC比较，有统计学意义（P<0.05）。④WB检测不同子宫内膜细胞内p57kip2、cyclin D1蛋白的表达：p57kip2蛋白在Ishikawa细胞中表达最高，在ESC细胞中表达最低，有统计学意义（P﹤0.05）；cyclin D1蛋白在JEC、Ishikawa细胞中的表达高于ESC细胞，均有显著性（P﹤0.05）。 结论:p57kip2、cyclin D1参与了子宫内膜细胞的体外增殖调控，cyclin D1可通过调控细胞周期进程来促进EC细胞的增殖，p57kip2的异常表达可能协同cyclin D1发挥这一作用。 （二）p57kip2、cyclin D1在雌、孕激素作用JEC细胞中的表达及意义 目的：探讨p57kip2、cyclin D1在雌、孕激素作用JEC细胞中的表达及意义。 方法：选取人子宫内膜癌JEC细胞（中分化）进行细胞培养，实验设计分组：实验组加入含不同浓度雌二醇（β-Estradiol，E2）及孕酮（Progesterone，P）的培养基，同时以未加药的细胞设为对照组。其中 E2组分为高、中、低浓度组（10-6mol/L、10-8mol/L、10-10mol/L），P组分为高、中、低浓度组（10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L）。用MTT法、FCM法、WB法及实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法观察JEC细胞在加入雌、孕激素后细胞增殖活性及细胞周期分布的变化，同时检测p57kip2、cyclin D1蛋白及mRNA表达水平的变化。 结果：①MTT观察细胞生长情况：E2组显示，不同浓度的E2作用JEC细胞24h、72h、96h后，中、低浓度组OD值比对照组高，有统计学意义（P﹤0.05）；作用48h时，仅低浓度组OD值较对照组高，有统计学意义（P﹤0.05）。P组显示，高浓度P组JEC细胞24h、48h、72h、96h后，其OD值明显低于对照组，有统计学意义（P﹤0.05），低浓度P组JEC细胞24h后，其OD值与对照组比较无明显变化，作用96h后，其OD值比对照组高，有统计学意义（P﹤0.05）。②FCM分析细胞周期：G1期分布最多的是P组，最少的是E2组，S期分布最多的是E2组，最少的是P组，处于G1期和S期的E2组分别与P组、对照组比较有统计学意义（P﹤0.05）；处于G2期最多的是P组，最少的是E2组，但总的比较无统计学意义（P>0.05）。③WB检测JEC细胞内p57kip2、cyclin D1蛋白的表达：同一时间段比较，E2高浓度组48h后p57kip2蛋白的表达高于低浓度组，E2中浓度组48h后cyclin D1蛋白的表达高于低浓度组，有统计学意义（P﹤0.05）。P高浓度组48h及72h后cyclin D1蛋白的表达高于低浓度组，有统计学意义（P﹤0.05）。随着时间延长各组细胞p57kip2、cyclin D1蛋白的表达总体呈上升趋势；药物作用48h后p57kip2蛋白的表达P组高于E2组，72h后cyclin D1蛋白的表达E2组高于P组，有统计学意义（P﹤0.05）。④PCR检测JEC细胞内p57kip2、cyclin D1mRNA的表达：同一时间不同浓度E2组JEC细胞随着浓度升高，p57kip2、cyclin D1mRNA的表达呈升高趋势。P组随着浓度升高，p57kip2、cyclin D1mRNA的表达呈下降趋势，随着时间的延长，p57kip2mRNA的表达在E2组呈升高趋势，在P组呈下降趋势，cyclin D1mRNA的表达在E2组呈下降趋势，在P组呈升高趋势，有统计学意义（P﹤0.05）；相同时间p57kip2、cyclin D1mRNA的表达E2组高于P组，但无统计学意义（P>0.05）。 结论:一定浓度雌、孕激素可调控JEC细胞的体外增殖。雌激素能促进JEC细胞的增殖，孕激素则抑制 JEC细胞的增殖；雌激素的刺激导致 cyclin D1表达的升高及p57kip2表达的下降，从而介导了其促进与抑制EC细胞增殖活性的功能，孕激素的作用与雌激素相反；雌、孕激素的这种调控作用具有时间及浓度效应性。