雄黄为硫化物类矿物雄黄族雄黄,入药始载于汉·《神农本草经》。宋·《小儿药证直诀》最先提出“研水飞”。本品辛,温;有毒。归肝、大肠经。具有解毒杀虫,燥湿祛痰,截疟的功效。入内服制剂未有特殊规定均用炮制品（雄黄粉）。《中国药典》（2015年版）与《中国药典》（2010年版）有关于雄黄药材及饮片的规定未有变化。药典规定雄黄的主要成分为二硫化二砷（As2S2）,炮制方法为水飞法,但对该法的记述不尽详细;规定了雄黄药材的含砷量以二硫化二砷（As2S2）计,不得少于90.0%。对雄黄粉的质量评价仅对三氧化二砷进行限量检查,并未对性状及含砷量进行规定。福建等省中药炮制规范还收载了干研雄黄的炮制方法。本课题是10种含矿物药的外用制剂安全性与可控性研究课题的一部分,并进行延伸。目前市售雄黄粉质量如何,是否采取水飞法炮制,其含砷量多少,均有待考察。本课题旨在研究雄黄粉饮片粒径、颜色等性状及含量的质量控制标准,并比较水飞雄黄和干研粉碎雄黄在粒径趋于一致时,二者在化学成分种类、含量及毒性之间的异同,初步阐述水飞炮制的原理。亦对市售雄黄饮片的质量进行了考察。目的:对雄黄不同炮制品的粒径、颜色及含砷量进行了研究;对水飞炮制的雄黄和趋飞雄黄,分别从形态、元素、可溶性砷及总砷含量等方面进行比较研究,并结合急性毒性研究,初步阐述水飞炮制原理。通过对市售雄黄饮片的粒径、颜色、含砷量等进行了考察,了解雄黄市售饮片的质量情况。方法:雄黄样品的炮制:对于2个来源的雄黄药材,分别制备了雄黄的水飞品、趋飞品、干研品、水洗品、30%醋酸飞品、30%醋酸洗品、0.2%盐酸飞品、0.2%盐酸洗品,9个来源的雄黄药材,仅制备了水飞品、趋飞品。1以去离子水为分散介质,采用激光法测定雄黄各炮制品的粒径,采用SPSS20.0对雄黄各炮制实验结果聚类分析。2采用色差仪测定雄黄各炮制品的颜色进行测定,采用SPSS20.0对雄黄各炮制实验结果进行多元正态性检验和方差齐性检验,采用SIMCA-P+12对结果进行主成分分析。3采用药典法测定不同来源雄黄各炮制品的二硫化二砷（As2S2）含量。4采用X衍射技术（XRD）结合High score plus软件半定量分析雄黄炮制品的物相组成,确定雄黄的主要物相及晶体结构。5采用扫描电镜（SEM）观察水飞雄黄及趋飞雄黄在10000倍镜下的形貌特征,扫描电镜-能谱（SEM-EDS）技术测定水飞品及干研趋飞品元素种类及含量。6以人工肠液提取,以氢化物发生器-原子吸收法测定水飞雄黄、趋飞雄黄的可溶性砷含量。7以微波消解样品,以火焰光度原子吸收法测定水飞雄黄、趋飞雄黄的总砷含量。8以小鼠的急性动物实验评价水飞雄黄及趋飞雄黄的毒性大小。观察给药后各组小鼠中毒反应及死亡情况,连续观察14d,通过SPSS20.0统计软件分析得半数致死量（LD50）及其95%的可信区间。9分别采用药典法、X衍射技术（XRD）、激光粒度法、色差仪、原子吸收法测定不同市售雄黄饮片的二硫化二砷含量、物相组成、颜色、及可溶性砷、总砷含量。结果:1本实验对2个来源的8种炮制品及9个来源2种炮制品的的中位粒径（D50）进行测定,以产自于贵州的XH-7号样品为例列举中位粒径（D50）的大小,水飞品:9.54μm,趋飞品8.41μm,干研品19.03 μm,水洗品19.39μm,30%醋酸飞品8.18μm,30%醋酸洗品19.66μm,0.2%盐酸飞品9.70μm,0.2%盐酸洗品19.44μm。结果显示,飞法处理后中位粒径多在10-13μm范围内,洗品与干研品在15-20μm范围内。经SPSS20.0聚类分析,结果飞品及趋飞样品聚为一类,洗法及干研品聚为一类。2本实验对2个来源的8种炮制品及9个来源2种炮制品的颜色进行测定,发现雄黄经水飞法炮制后其L*值在59～67范围内,a*值多在31～44范围内,b*在52～70范围内。3本实验对2个来源的8种炮制品及9个来源2种炮制品的二硫化二砷（As2S2）含量进行测定,以产自于贵州的XH-7号样品为例列举硫化砷含量大小,水飞品:94.01%,趋飞品93.13%,干研品92.77%,水洗品93.43%,30%醋酸飞品94.67%,30%醋酸洗品94.05%,0.2%盐酸飞品94.52%,0.2%盐酸洗品93.61%。结果表明:其二硫化二砷含量均是飞法>洗法>干研法。4 XRD测得药用雄黄其主要成分是α雄黄（AsS）或/和β雄黄（As4S4）。伴生矿石主要是二氧化硅（SiO2）和三硫化二砷（As2S3）。均未检出三氧化二砷（As2O3）。5通过SEM对水飞及干研趋飞雄黄于10000倍镜下观察,发现水飞品较趋飞品其表面有一定区别,水飞后表面平滑钝圆,附着粉末较多,趋飞品多呈多角状、锐尖状。6通过SEM-EDS测定雄黄水飞品与干研趋飞品的元素种类及含量,发现样品中元素以砷元素与硫元素为主,两者的重量百分比合计值均大于90%,砷元素与硫元素的原子百分的比值,水飞品比值在1.1左右,趋飞品在1.3左右。7氢化物发生器原子吸收法测定11个来源的雄黄水飞品与干研趋飞品可溶性砷含量,同一来源的雄黄飞品较趋飞品可溶性砷含量明显增加,各炮制品可溶性砷含量在1.8%～5.0%范围内。8火焰光度原子吸收法测定雄黄炮制品的总砷含量,同一来源的雄黄飞品较趋飞品总砷含量升高。9水飞雄黄与趋飞雄黄的LD50分别是9.312g/kg、11.852g/kg。10采用药典法测定9批市售雄黄饮片的二硫化二砷含量,其含量在7%～87%范围内,小于90%,均不符合药典规定。XRD测得XH-18市售雄黄饮片主要成分为二氧化硅（SiO2）,系雄黄伪品。采用激光法测定市售雄黄饮片的粒径,发现其中位粒径在3～20μm范围内。色差分析市售雄黄饮片颜色,L*值多在50左右,a*值在30左右,b*值在40左右。AAS法测定可溶性砷,发现除XH-15雄黄粉样品外,剩余样品的其可溶性砷含量均在1%以下。总砷测试结果与药典法滴定结果基本一致。结论:1不同炮制方法对于雄黄粒径是有影响的,雄黄经飞法处理后,粒径明显降低,D50在10～13μm范围,洗法并不会改变雄黄粒径的大小。2雄黄粒径的大小对于其颜色有影响,粒径越小,b*值越大,雄黄整体越偏向于黄色,颜色越鲜艳。3雄黄各炮制品二硫化二砷（As2S2）含量均大于90%,飞法炮制其主成分含量增加,说明经水飞炮制有除杂作用。4XRD研究发现雄黄主成分应为As4S4或/和AsS,《中国药典》（2015年版）一部规定雄黄的主要成分是二硫化二砷（As2S2）,药典对其主要成分规定存在问题,建议进行修订。5根据SEM在10000倍镜下观察,可以初步区分水飞雄黄和趋飞雄黄。6根据SEM-EDS测定的砷元素与硫元素重量百分比的合计值可以初步判定雄黄炮制品是否符合药典规定;雄黄中砷存在3种形式,游离砷、与氧结合的砷、与硫结合的砷,砷元素与硫元素原子百分比的比值大小,代表与硫元素结合的砷元素的个数,水飞雄黄比值明显小于趋飞雄黄,说明雄黄经水飞法处理后,确实去除了雄黄的毒性。7雄黄样品的来源是影响其可溶性砷含量的重要因素,同一来源的雄黄水飞品和干研趋飞品相比,水飞品的可溶性砷含量显著高于干研趋飞品,可溶性砷含量增加,意味着药效增强。8.雄黄经水飞处理后,XRD分析结果、结合药典法滴定结果及总砷的测定结果,说明雄黄经水飞炮制具有除杂的作用;SEM-EDS测定的砷元素与硫元素原子百分比的比值大小,说明水飞炮制具有减毒作用;AAS法测定水飞品可溶性砷含量升高,即雄黄经水飞处理后,增强了其药效。总体说明水飞炮制雄黄具有除杂、减毒、增效三重作用。结合急性毒性实验,说明雄黄的毒性大小与可溶性砷含量密切相关;推测雄黄经水飞后增效作用可能也要强于其减毒作用,有待于进一步验证。9市场上流通的的雄黄粉多数系雄黄伪品,而砷斑的进行限量检查,无法对市售雄黄饮片的质量进行鉴别,建议增加雄黄饮片项下硫化砷含量测定的方法。市售雄黄饮片粒径范围较广,颜色整体不如雄黄水飞品颜色亮、鲜艳、色调黄。建议药典增加雄黄饮片项下粒径及颜色测定方法来控制雄黄饮片的质量。