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MicroRNAs(miRNAs,miR)是一种长度一般为18至25个核苷酸的高度保守的内源性单链小分子RNA。MiRNAs不起到编码蛋白质的作用,但可以通过与特定目的基因mRNA的3非翻译区序列互补结合,从而起到抑制mRNA的翻译过程或者直接致使其降解而调节下一步的生物学作用。自发现miRNAs之后,其在众多领域中被广泛研究。肿瘤的发生、发展是一个多基因作用的过程,而miRNAs由于其本身特点在肿瘤发生及进展中起着重要的作用,故其近年来已成为肿瘤研究领域的热点之一。目前为止,MiRNAs已被证实与多种肿瘤相关。MiRNAs在肿瘤中主要通过调节不同的通路及其他基因而起到抑癌或促癌作用,它可以作用在细胞调节的各个环节,包括细胞循环、细胞凋亡、细胞的迁移与侵犯等。 乳腺癌一直是严重威胁女性生命健康的全球性问题,近年来乳腺癌在外科手术及辅助治疗方面的进展已达到一定的局限,故怎样寻求更有效的辅助治疗手段提高乳腺癌预后一直是乳腺癌治疗领域中的热点问题。而miRNAs的出现为乳腺癌指明了一条新的研究方向。目前为止,已有多种miRNAs被证实与乳腺癌的发生、发展、预后及耐药相关。而MiR-212虽被发现与多种肿瘤的发生、发展及侵袭性相关,如非小细胞性肺癌细、胰腺导管腺癌、胃癌等,但却鲜有其与乳腺癌的可能关联及作用机制的研究。 故本研究首先通过基于SYBR GreenⅠ染料荧光分析的Realtime RT-PCR技术检测乳腺浸润性导管癌中的miR-212的表达,并分析其与乳腺癌常见的临床病理特征的关系。然后通过转染miR-212 inhibitor至乳腺癌MCF-7细胞株中检测其对乳腺癌细胞增殖活力及侵袭性的影响。探讨miR-212在乳腺癌发生发展中可能的作用及其临床意义。 目的: 探索miR-212在浸润性乳腺导管癌组织中的表达情况,并分析其与各临床病理特点之间的相关性及对乳腺癌细胞的影响。 方法: 采用茎环Realtime RT-PCR技术检测37例配对浸润性乳腺癌癌组织及癌旁正常乳腺组织组织中miR-212的表达情况,统计分析其表达水平并将之与乳腺癌常见临床病理指标做比较。设计并合成miR-212 inhibitor,分别以20、40、80nM浓度通过LipofectamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞株,同样采用Realtime RT-PCR技术检测转染前后MCF-7细胞株中miR-212表达情况。利用CCK-8法分析转染miR-212 inhibitor后细胞活力,通过Transwell实验检测细胞的侵袭能力。 结果: 1.根据扩增曲线及溶解曲线结果发现利用Realtime RT-PCR检测技术可特异性检测miR-212的表达。 2.miR-212在浸润性乳腺癌组织中的相对表达量明显高于癌旁配对的正常乳腺组织,两者的差异具有显著性(P<0.001)。 3.miR-212表达水平在乳腺癌患者合并淋巴结转移中明显高于其对应淋巴结转移阴性患者(3.375 vs.1.452, P=0.003)。并且较高TNM分期及较高增殖指数(ki67)的乳腺癌患者也具有较高的miR-212表达水平(Ⅲ期=4.422 vs.Ⅱ期=2.633 vs.Ⅰ期=1.452;P=0.015),(3.260 vs.1.394,P=0.013)。未发现乳腺癌中miR-212表达水平与月经状况、肿块大小、雌激素和孕激素受体状态、Her-2等其他病理指标相关(P>0.05)。 4.不同浓度miR-212 inhibitor转染后的MCF-7细胞株中表达miR-212较阴性对照组及空白组均明显减少(P<0.001)。 5.CCK-8实验发现不同浓度miR-212 inhibitor的转染组较对照组及空白组细胞增殖活力均明显下降,存在统计学差异(P<0.001),提示miR-212表达下调导致细胞活力下降。 6.Transwell实验发现不同浓度miR-212 inhibitor的转染组透膜细胞明显少于阴性对照组及空白组(P<0.001),提示抑制miR-212表达可抑制肿瘤细胞的侵袭性。 结论: miR-212在浸润性乳腺癌癌组织中呈高表达情况,且与淋巴结转移、高TMN分期及较高增殖指数(ki67)相关。同时细胞实验发现转染miR-212 inhibitor后,乳腺癌细胞的增殖活力及侵袭性明显受到抑制。故miR-212可能与浸润性乳腺癌发生及发展明显相关。