第一部分SPARCL1和Integrinβ1在难治性颞叶癫痫患者及致痫大鼠中的表达变化及相关性分析目的:癫痫的特征在于癫痫发作的反复发生,这是脑中异常放电的临床表现。通过检测SPARCL1和Integrinβ1在难治性颞叶癫痫患者蛋白表达变化及定位情况,在Li Cl-PILO诱导癫痫大鼠及PTZ致痫大鼠中的m RNA和蛋白表达变化,以初步探讨SPARCL1和Integrinβ1在癫痫发生发展过程中的可能作用机制。方法:1.临床标本研究:从已有标本库中抽取10例难治性颞叶患者的颞叶皮质和4例同一批标本的对照组颞叶皮质。采用免疫组化和免疫印迹分别检测SPARCL1和Integrinβ1蛋白在患者颞叶表达变化。2.动物实验研究:（1）随机取56只21d幼年雄性SD大鼠分为对照组和模型组,其中21只对照组,35只模型组。模型组再分为3h组、6h组、12h组、1d组、2d组、3d组和7d组7亚组,每亚组设3只对照组。模型组用Li Cl-PILO腹腔注射处理,对照组用同等剂量生理盐水替代。（2）选择出生21d幼年雄性SD大鼠15只,随机分为对照组和模型组,其中对照组5只,模型组10只。模型组用PTZ腹腔注射处理,对照组用同等剂量生理盐水代替。选择连续5次发作级别达到IV级或者观察到自发发作的大鼠归为癫痫组,而未能达到IV级的大鼠归为对照组。采用RT-q PCR技术及Wb分别检测SPARCL1和Integrinβ1在致痫大鼠海马和颞叶组织中m RNA和蛋白的表达水平。结果:1.与对照组相比,难治性癫痫患者脑组织中SPARCL1和Integrinβ1 m RNA和蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）。2.与对照组相比,PTZ慢性癫痫大鼠中SPARCL1和Integrinβ1 m RNA和蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）。3.在Li Cl-PILO癫痫大鼠中,RT-q PCR结果显示,在海马组织中,与对照组相比,SPARCL1在SE后1d内表达显著降低（P<0.05）,以3h和6h降低更为明显（P<0.01）。而SE后2d至7d表达回升接近正常水平（P>0.05）。Integrinβ1在SE后3h和6h表达显著降低（P<0.05）,12h时表现为跟正常组无显著差异（P>0.05）,1d和2d时表达显著升高（P<0.05）而在3d和7d有降低接近正常水平（P>0.05）。pearson相关性分析,显示在海马组织中SE后6h、1d、3d相关系数分别为0.996、0.97及0.968,SPARCL1和Integrinβ1有显著相关（P<0.05）。4.在Li Cl-PILO急性癫痫大鼠海马组织中,SPARCL1和Integrinβ1在3h,6h,12h相对于对照组均降低,尤其是在SE后6h,两者明显下降（P<0.05）,并且在该时间点,Pearson相关性分析结果为相关系数0.993。在急性期（1d,2d,3d）,SPARCL1蛋白在SE后1d和2d均显著降低（P<0.05）,而3d和7d无显著差异（P>0.05）。表明SPARCL1蛋白在SE后的7天内,表达先降低后升高到接近正常水平。而在急性期相对于正常组,Integrinβ1在SE后1d、2d及第3d,均跟正常组无明显差异（P>0.05）,第7d表达显著升高（P<0.05）。综上,表明在海马组织中SPARCL1和Integrinβ1的表达量出现先减低后升高的现象。总体而言,SE后1周内,总的变化趋势极其相似。在皮层组织中,与对照组相比,SPARCL1在SE后3h和6h相对于正常组均无显著差异（P>0.05）。SE后1周内12h及以后的时间点均出现表达显著下降（P<0.05）,并且下降趋势越来越明显。而Integrinβ1在SE后6h即开始出现表达显著下降,同样也表现为下降趋势越来越明显。总体而言,SE后1周内,总的变化趋势相似。结论:SPARCL1及Integrinβ1在难治性患者和Li Cl-PILO癫痫大鼠颞叶组织中表达的总体趋势基本一致,且有明显相关性,提示其可能参与了癫痫的发生及发展过程。第二部分三种抗癫痫药物对致痫大鼠SPARCL1和Integrinβ1表达的影响目的:建立Li Cl-PILO幼年SD大鼠癫痫模型,为进一步探讨抗癫痫药物的抗癫痫作用是否与SPARCL1和Integrinβ1有关。观察LEV对癫痫海马和颞叶皮层组织中SPARCL1和Integrinβ1表达的影响,以探讨LEV可能的抗癫痫可能作用机制。建立PTZ慢性点燃癫痫大鼠模型,观察TPM和VPA对癫痫海马和颞叶皮层组织中SPARCL1和Integrinβ1 m RNA和蛋白表达的影响,以探讨TPM和VPA可能的抗癫痫作用机制。方法:（1）20只21d龄雄性SD大鼠随机分成NS对照组5只、LEV对照组5只、PILO组5只、PILO+LEV组5只。模型组27mg/kg腹腔注射。间隔大约20h后,阿托品1mg/kg,再PILO 50mg/kg腹腔注射诱发癫痫发作。若癫痫发作未达标准,10min后再继续PILO 15mg/kg腹腔注射追加,直至完全点燃。癫痫发作达V级者,10min后腹腔注射地西泮10mg/kg,以控制癫痫发作,降低死亡率。对于治疗组大鼠,每日按300mg/kg LEV口服液灌胃治疗,连续灌胃4周治疗后,分别处死各组大鼠,并用RT-q PCR和Wb技术检测及观察海马和颞叶皮层组织中SPARCL1和Integrinβ1表达的变化。（2）将37只21d龄SD雄性大鼠随机分为NS组5只、TPM对照组5只、VPA对照组5只。将剩余22只大鼠,每天上午9点PTZ 35mg/kg给予腹腔注射,连续注射35天。观察模型组大鼠连续5天发作达到IV级及以上,视为慢性点燃成功,癫痫发作达IV级者,10min内腹腔注射地西泮10mg/kg,以控制癫痫发作,降低死亡率。2只未点燃成功,将慢性点燃癫痫成功模型的20只大鼠,随机分为PTZ组（5只）和PTZ+VPA（7只）、PTZ+TPM（8只）共3组。对照组每日给予等剂量NS灌胃,治疗组分别每日给予TPM 50mg/kg和VPA 300mg/kg灌胃治疗,分别3周后取材,并检测海马和颞叶皮层组织中SPARCL1和Integrinβ1m RNA和蛋白的表达水平。结果:（1）Li Cl-PILO诱导幼年大鼠癫痫模型中,PILO组与NS对照组相比,SPARCL1和Integrinβ1的表达均升高（P<0.05）。LEV治疗组与PILO组相比,SPARCL1和Integrinβ1的表达显著降低（P<0.05）。LEV对照组与NS对照组无统计学意义（P>0.05）。（2）PTZ致痫大鼠中PTZ组与NS对照组相比,SPARCL1和Integrinβ1的表达均降低（P<0.05）。VPA和TMP治疗组与PILO组相比,SPARCL1和Integrinβ1的表达无显著差异（P>0.05）。VPA和TMP对照组与NS对照组无统计学意义（P>0.05）。结论:Li Cl-PILO诱导幼年大鼠癫痫模型中,癫痫发作后模型组SPARCL1和Integrinβ1的表达均显著升高,提示SPARCL1和Integrinβ1与癫痫形成密切相关,LEV通过抑制海马和颞叶皮层组织中SPARCL1和Integrinβ1d的表达而发挥抗癫痫发作。本研究VPA和TPM海马和颞叶皮层组织未观察到SPARCL1和Integrinβ1表达变化,认为SPARCL1和Integrinβ1转导通路可能不参与VPA和TPM的抗癫痫作用。