马铃薯干腐病接骨木镰刀菌检测体系建立的研究

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马铃薯干腐病是由镰刀菌引起的一种真菌病害,可以导致薯块高度腐烂,是马铃薯长时间贮藏的主要病害之一。在黑龙江省地区马铃薯窖藏过程中,一般年份损失率约为20%-30%,已经给我省马铃薯产业造成了巨大的经济损失。因此,马铃薯的干腐病已经成为影响我省马铃薯储藏和商品品质的重大障碍。本研究对黑龙江省马铃薯干腐病主要病原菌进行了分离及致病性测定,依据镰刀菌的rDNA区域保守序列设计特异性引物对马铃薯干腐病主要病原菌进行了分子鉴定,并在此基础上进行常规PCR检测体系的建立,从而确立一套马铃薯干腐病的快速、灵敏、准确的分子检测体系,这些研究成果对于黑龙江省马铃薯真菌病害检测水平的提高具有重要的实践指导意义。论文主要研究结果如下:1.本研究收集了黑龙江省内哈尔滨等5个地区的马铃薯干腐病病样120个,并进行了分离和病原菌纯化。分离到马铃薯干腐病的致病菌有3种镰刀菌,分别为燕麦镰刀菌(Fusarium.avenaceum)、接骨木镰刀菌(F.sambucinum)、茄病镰刀蓝色变种(F.solani var. coeruleum)。对三种病原菌致病力进行了测定,以接骨木镰刀菌(F.sambucinum)最强,燕麦镰刀菌(F.avenaceum)次之,茄病镰刀蓝色变种(F. solani var. coeruleum)最弱。2.本研究采用改良的SDS方法获得了高质量的五个镰刀菌基因组DNA。利用本研究室马铃薯干腐病主要病原菌检测所确定的引物LDJ1进行了DNA分子鉴定验证。形态学特征鉴定的三种病原菌,经PCR后测序获得含有镰刀菌全部的ITS1和ITS2序列的rDNA的560bp的特异片段,再次验证了用这个引物对马铃薯干腐病主要病原菌进行DNA分子鉴定方法的正确性。3.本研究通过DNAman软件对上述3种致病菌的560bp片段进行了比对分析,根据接骨木镰刀菌(F.sambucinum)的DNA差异性用Prime5.0设计了特异引物,扩增产物应为278bp。对接骨木镰刀菌进行PCR扩增后进行了测序比对,结果为相应的278bp,通过DNA分子鉴定为接骨木镰刀菌。即本研究创新建立了接骨木镰刀菌的DNA分子鉴定方法。检测灵敏度达到50pg/μl,可用于窖藏马铃薯干腐病的检测。为以后研制接骨木镰刀菌DNA分子鉴定试剂盒打下基础。
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