农业害虫对农业生产存在着严重危害。通过化学农药对害虫进行毒杀的效果虽然显著,却带来了农药残留、环境污染和生态平衡等问题。近年来,应用基因克隆和转基因技术进行抗虫植物育种研究,为控制农业害虫提供了新的思路。石蒜科植物凝集素具有很好的抗虫效果,其中的雪花莲凝集素基因已被应用于抗虫植物育种。中国水仙凝集素对一些刺吸式昆虫有着很好的抑制作用,因此,克隆其凝集素基因,研究其抗虫功能,可为进一步开展抗虫植物育种提供有价值的参考。本研究从中国水仙‘金盏银台’中克隆出了一个凝集素基因,构建了双子叶植物表达载体,并成功将其转化到烟草和拟南芥中,得到了转基因植株;构建了原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达了该凝集素蛋白。主要结果如下:1.利用RT-PCR技术从中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)‘金盏银台’中克隆到一个新的编码凝集素的基因NTL1。序列分析与预测结果表明,该基因cDNA片段总长为609 bp,含有一个由25个氨基酸残基组成的信号肽和一个519 bp的完整开放阅读框;编码172个氨基酸,分子量为18.7 kD;前体蛋白在氨基酸水平上与杂种多花水仙凝集素、雪花莲凝集素、石蒜凝集素的一致性分别为83%、81%和77%;结构预测显示,其二级结构以α-螺旋、不规则盘绕和延伸链为主;三级结构与雪花莲凝集素极其相似,是一种能与α-D-甘露糖特异性结合的凝集素。2.利用RT-PCR方法,以18S rRNA作为内参基因,研究了NTL1基因在中国水仙中的组织特异性表达模式,发现NTL1基因在根、鳞叶、叶片与花器官均有表达。3.采用直接添加酶切位点的方法,将NTL1基因构建到双元表达载体pBI121的多克隆位点,形成由35S启动的植物表达载体。分别采用叶盘法和蘸花法转化烟草和拟南芥,获得了抗性植株。经PCR检测,证明获得了转NTL1基因植株,并对转基因拟南芥T1代植株进行了分析,初步确定NTL1基因在烟草和拟南芥中得到表达。4.以pET-23a为载体,构建了包含NTL1基因编码成熟蛋白序列的原核表达载体pET-NTL1-mature,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。蛋白质电泳结果显示,经过IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌中能够高效表达,诱导表达蛋白的分子量约为18.7 KDa,并以包涵体的形式存在,占总蛋白比例在40%以上,这为进一步研究其活性奠定了基础。