研究背景：恶性实体瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，它是由肿瘤细胞和间质细胞构成的组织恶性增生性疾病。肿瘤细胞的无限增殖是其重要的特性，而肿瘤血管内皮细胞的增殖和血管生成则是实体瘤恶性转化、生长和转移的生物基础和重要环节。因而，任何一类抑制肿瘤细胞或内皮细胞生长的药物都具有肿瘤治疗作用，前者即为细胞毒类药物，后者则是抗血管生成药物。 血管抑素(angiostatin, AS)是肿瘤源性血管生成抑制因子。大量研究表明：AS能有效地抑制血管内皮细胞的增生和迁移，阻止血管发生，促进实验动物肿瘤原发灶消退，抑制转移灶的形成；单纯应用AS治疗需要长期用药，而天然的AS来源非常有限；AS的基因治疗仍存在着表达不稳定、转染效率低、病毒载体具有潜在危险性等目前难以解决的问题。所以AS与传统的肿瘤治疗手段联合便成为AS治疗实体瘤的发展方向之一。它与X线外照射联合的研究表明，AS的抗血管生成与X射线的治疗作用之 第o弓区上晕枉士管住伦丈一间有明显协同作用，为实体瘤“双靶向”治疗奠定了实验基础。放射性核素内照射治疗也是传统的肿瘤治疗手段之一，放射性核素在肿瘤诊断和治疗中具有明显的优势。已有研究显示，放射性碘标记的AS能与内皮细胞特异性结合，并可作为肿瘤的新型显像剂，但它对内皮细胞增殖活性有何影响，在实体瘤治疗中有无应用价值，目前尚未明确。因此，为了进一步研究放射性碘标记AS的抗肿瘤作用，本课题拟从细胞水平和整体水平研究放射性核素“‘I标记 AS的生物活性和抑瘤作用机理，为’3‘1．AS在临床中的“双靶”应用提供实验与理论依据。 目的：观察“丫AS在体外对内皮细胞增殖活性的影响，探讨“丫AS在实体瘤治疗中的临床应用前景，为’“1．AS用于实体瘤治疗提供实验与理论基础。 方法： 1．体外采用原代细胞培养和形态学观察等方法，分析‘3‘IAS、‘3勺和AS对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖的影响。 ①不同浓度‘’丫AS和 pBS作用后的细胞，经常规固定、HE染色， 观察其形态学改变和核分裂指数的变化。 ②MTT法观察厂I－AS、‘刀I和AS对HUVEC生长的抑制作用，490 urn波长下测定吸光度（ODM＊。计算细胞生长抑制率，抑制率（％） 一门－实验孔 OD。9。／对照孔 OD。。。）XI 00％。 2．体内通过动物实验，评价‘引I－AS、‘引1和 AS对小鼠 L＼WIS肺癌移植瘤的治疗效果。30只荷 Lews肺癌的 C57BL／6雄性小鼠（右前肢皮下移植瘤直径m一），分成4组，分别腹腔注射“丫As（含”’1门IMBq，AS 12．sing／kg）、AS 12．sing／kg、‘3‘I门刁MBq和生理盐水各 0．2＊L，隔日1次，治疗14天，观察肿瘤体积的变化，并用常规病理方法和免疫组化法检测各组肿瘤组织中细胞形态学的改变和CD34、NFkBp65的表达。 结果： 3 第9刃医上亏枉士学佰伯友一 1．体外细胞实验显示： 1＊培养的HUVEC细胞呈多角形，相互嵌合，为单层铺路石状排列，有丝分裂像的细胞较多。“丫AS处理后，细胞稀疏，胞体变小，呈梭形，透光性下降，脱落细胞和碎片增加，此变化随给予‘3nAS时间的延长和剂量的增加而加重。HE染色核分裂像明显减少，核分裂指数降低（P＜0刀1）。 1．2 MTT法测定细胞生长抑制率显示： ①单纯 AS在浓度为o～32）pg／ml时，对体外培养的 HUVEC生长抑制 率为门．4上5．4）o～（17．6土2．7）O（Prto．01X 其生长抑制率随AS浓 度增高而升高，抑制作用呈现剂量效应依赖关系；当浓度小于Zpg／ml 时，＊S对其无抑制作用（P＞0刀引。 ②“‘I在浓度小于工96 GBq／L时，对 HUVEC的增殖无明显抑制作用 （P＞0刀5人在浓度为 3．7 GBq／L时，’3‘I对 HUVEC的生长抑制率 为＊ ．sl士 2．70（P＜0．of）。 ③4种浓度的‘刀I－AS对HUVEC的抑制率分别为 14．8i4．20、22．5 士 3．9o、17．3士 3．7O和 31．4士 3．60，与相同浓度 AS和相同比浓度 ’“1比较，抑制率明显提高，统计学差异非常显著0叼刀1人 2．动物实验显示 LJ随着接种瘤细胞时间的增加，各组小鼠肿瘤都逐渐增大，但’3trAS治疗组肿瘤生长明显缓慢。治疗结束时，与生理盐水组比较，三组均有抑瘤作用，’‘丫AS、AS、‘3‘I对小鼠 LCWS肺癌移植瘤的抑瘤率分别为＊．3土1．7％、46石土3．2％（p＜0刀1）和21．脏4．8％（p＜0＊5）； 2．2 CD34的表达：生理盐水组 7例移植瘤组织中 CD34均呈弥漫分布，阳性呈棕黄色至棕褐色，表达程度为 6厂（＋＋H，lo（＋＋）；’引1组 CD34表达减暮，为5／（什），3／（十）；＊S组为5／（计），2／7（十）：‘＊＊＊S组表达为 8／8卜人统计学分析显示，与NS组比较，’3‘1．AS治疗组肿瘤组织 CD34的表达明显减弱（p＜0．of）。