槲寄生的质量表征及寄主对其影响的初探

来源 :中国中医科学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:a7281423123
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中药槲寄生为半寄生植物槲寄生Viscum coloratum(Kom.)Kakai的干燥带叶茎枝,具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎元的功能。槲寄生在全国分布较广,多寄生于桑、榆、杨、枫杨、梨等植物上,《中华人民共和国药典》“槲寄生”项下没有对中药槲寄生的寄主植物进行限定。从明代《本草纲目》的记载“桑上寄生……须自采或连桑采者乃可用。世俗多以杂树上者充之,气性不同,恐反有害也……”(“桑上寄生”是指长在桑树上的槲寄生),可以看出,古代医家认为源于桑树的槲寄生可用,寄主的种类会影响槲寄生的疗效甚或会引发毒性。由此可见,寄主对槲寄生药材质量及安全性的影响不容小觑。但目前相关的研究还较少报道,有待进一步加强。本论文采集了 3省5个产地14个不同寄主的24批槲寄生样本,采用多学科技术和方法,从槲寄生初生代谢产物、次生代谢产物、生物活性等方面,对槲寄生质量进行表征,考察寄主对寄生质量的影响;同时,首次以吸器为切入点,探索寄主与槲寄生化学成分的交流。1.采用高光谱成像技术,采集产自3个省6个寄主的119份槲寄生样本的波谱数据,采用化学计量学的方法对波谱数据进行分析,发现不同来源的槲寄生样本呈现出分组聚类的现象,提示源自不同寄主的槲寄生样本质量表征上存在差异;使用计算软件对波谱数据进行预处理,建立了不同寄主来源槲寄生的判别模型。2.采用UPLC-QTOF/MS技术,对槲寄生化学成分进行了定性分析,推测/鉴定了 55个成分,包括29个黄酮类成分、8个二芳基庚酮类成分、8个酚酸类成分和10个其他类成分。其中,建立了六点质量亏损过滤法,对黄酮类成分进行分析,所推测的黄酮类成分主要为二氢黄酮类和黄酮醇类成分,包括3个槲皮素型黄酮、6个异鼠李素型黄酮、11个高圣草素型二氢黄酮、6个圣草酚型二氢黄酮和3个柚皮素型二氢黄酮。采用UPLC-QTOF/MS技术及化学计量学方法,对采自3个省、源自14个寄主的14批槲寄生样本的次生代谢产物组学数据进行分析,结果表明,产地和寄主是影响槲寄生化学成分变化的因素。其中,化合物C39(viscumneoside I)、C21(homoeriodictyol-O-glucosyl-apiosyl-glucoside)、C35(naringenin-rhamnosyl-glucoside)、C10(polygalatenoside E)和 C22(eleutheroside E)为源于寄主影响产生的槲寄生差异成分。3.采用UPLC-ELSD技术,建立了槲寄生中齐墩果酸成分的含量测定方法。结果显示,槲寄生样本中齐墩果酸的含量在0.8-6.4mg/g之间,其中,枫杨、山杨、辽东栎、刺槐、钻天杨寄主的槲寄生中齐墩果酸含量较高,大于4.0 mg/g。4.优化了槲寄生蛋白质的提取方法,对槲寄生的蛋白质含量进行了测定;采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对槲寄生的凝集素进行了分析。结果显示,不同寄主槲寄生样本中蛋白质的含量有差异,源自桑、小叶杨和枫杨寄主的槲寄生样本中蛋白质的含量较高;源自桑和枫杨寄主的槲寄生样本中凝集素的量可能较其他样本高。5.采用体外细胞实验及斑马鱼实验,对槲寄生的生物活性进行了比较研究。实验结果表明,槲寄生对肺癌细胞A549、肝癌细胞Hep G2、乳腺癌细胞MCF7有细胞毒作用;可显著抑制斑马鱼血栓的形成;具有明显的促进斑马鱼组织再生/伤口愈合的活性。源于不同寄主的槲寄生样本生物活性有异,其中,源于桑和枫杨寄主的槲寄生样本有较好的细胞毒作用,可能与其中所含的凝集素有关;源自山杨的槲寄生样本有较好的预防血栓和促进组织再生/伤口愈合活性,可能与其含有的黄酮成分种类较多、含量较高有关。6.采用UPLC-QTOF/MS技术,首次对槲寄生、寄主、寄生与寄主结节处、吸器的化学成分进行液质分析;采用化学计量学方法对质谱数据进行分析,实验结果显示,结节和吸器样本中化学成分与寄主样本的近似,与槲寄生样本存在较大差异;筛出差异化合物 C22、C23、C3、C35、C21、C36、C40、C11 和 C25,根据它们在寄主-吸器-槲寄生中的水平,推测可能是槲寄生和寄主相互交流的成分,进一步的研究还有待继续。综上所述,源自不同寄主的槲寄生样本在高光谱成像、初生代谢产物、次生代谢产物及生物活性等方面均有差异,提示了寄主对槲寄生质量的影响。寄主、吸器、槲寄生次生代谢产物组学研究结果显示,寄主与槲寄生之间存在化学成分的交流。提示我们应加强寄主对槲寄生质量影响的研究,以确保槲寄生临床用药的安全有效。
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