【摘 要】
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目的:考察重瓣铁线莲(Clematis florida var.plena)醇提物及不同极性部位对胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠的作用,探讨其可能的作用机制,为重瓣铁线莲资源的开发以及应用提供参考。方法:(1)采用渗漉法将重瓣铁线莲药材进行提取,用70%的乙醇提取总浸膏,浓缩提取液,然后用蒸馏水悬浮,依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取。(2)体内实验中采用小牛Ⅱ型胶原诱导关节炎模型(CIA模型),考察重瓣
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目的:考察重瓣铁线莲(Clematis florida var.plena)醇提物及不同极性部位对胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠的作用,探讨其可能的作用机制,为重瓣铁线莲资源的开发以及应用提供参考。方法:(1)采用渗漉法将重瓣铁线莲药材进行提取,用70%的乙醇提取总浸膏,浓缩提取液,然后用蒸馏水悬浮,依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取。(2)体内实验中采用小牛Ⅱ型胶原诱导关节炎模型(CIA模型),考察重瓣铁线莲总浸膏、正丁醇部位及水提物部位对RA的作用。模型建立成功后按体重随机分为模型组,雷公藤多苷阳性给药组(20 mg/kg),总浸膏低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg),正丁醇部位低、中、高剂量组(0.2、0.4、0.8 g/kg)、水部位低、中、高剂量组(0.4、0.8、1.6 g/kg)。通过测定体重、关节炎评分、脚踝宽度、足趾厚度、足趾容积及HE切片、Micro-CT、血清炎症细胞因子、微量法检测肝脏中MDA、SOD的含量等指标来评价总浸膏、正丁醇部位及水提物部位抗RA的作用。(3)体外实验中,TNF-α(20 ng/ml)刺激MH7A细胞,考察不同浓度重瓣铁线莲处理对MH7A细胞的影响。采用CCK-8检测不同浓度的重瓣铁线莲总浸膏对MH7A细胞增殖的作用;ELISA检测不同浓度的重瓣铁线莲总浸膏对MH7A细胞中IL-1β、IL-6、IL-10表达水平;Western Blot检测对增殖相关蛋白JAK2、STAT3、NF-κBp65表达的影响。结果:(1)分离得到重瓣铁线莲总浸膏、乙酸乙酯、正丁醇、水部位。(2)在D18至D42期间,与正常组相比,模型组体重、关节炎评分、脚踝宽度、足趾厚度、足趾容积,均具有显著性差异(P<0.05),与模型组相比,雷公藤多苷组、总浸膏低、中、高(0.5、1.0、2.0 g/kg)、正丁醇部位低、中、高剂量组(0.2、0.4、0.8 g/kg)及水部位低、中、高剂量组(0.4、0.8、1.6 g/kg)均不同程度的提高大鼠的体重、降低关节炎评分,减轻脚踝宽度、足趾厚度、足趾容积,抑制大鼠踝关节骨质侵蚀,炎症细胞浸润,降低关节损害程度。给药组均降低促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平、增加抗炎细胞因子IL-10的水平,给药组降低了肝脏中MDA的含量,具有显著性差异(P<0.05),增加了SOD的含量,无显著性差异。(3)与对照组相比,不同浓度的重瓣铁线莲总浸膏对MH7A细胞增殖均有显著性抑制作用;并能显著性地降低细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10表达水平;抑制JAK2、STAT3、NF-κB p65蛋白的表达。结论:体内实验显示重瓣铁线莲总浸膏对Ⅱ型胶原诱导诱导的大鼠关节炎具有抗炎抗氧化作用,不同萃取部位中正丁醇部位高剂量组(0.8 g/kg)及水部位低剂量组(0.4 g/kg)抗RA效果最好,不同活性部位之间并无显著性差异。体外实验研究显示重瓣铁线莲总浸膏可能通过抑制JAK2-STAT3-NF-κB p65信号通路,抑制MH7A细胞的增殖及炎症反应。
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