论文部分内容阅读
目的：miRNA是一类内源性的长度约20-23m的单链小RNA,通过介导靶基因的翻译抑制或降解发挥作用。差异表达miRNA在肿瘤的发生发展中起重要作用。世界范围内胃癌的发病率排在肿瘤中第四位,在肿瘤相关死因中排在第二位。虽然胃癌的治疗手段已经取得很大进步,但是预后仍然没有明显改善。本研究的目的是观察miR-1228*在胃癌中的作用并探讨其机制。方-法：采用实时定量PCR检测50例胃癌及癌旁组织的miR-1228*表达,并进一步分析miR-1228*与临床病理特征之间的相关性。为了评价miR-1228*在胃癌中的作用,建立了稳定过表达miR-1228*的细胞系,并观察miR-1228*对裸鼠皮下移植瘤的形成及生长状况的影响。构建miR-1228*启动子区荧光报告基因质粒pGL3-1228*-promoter,转染胃癌细胞,加入TNF-α干预,检测荧光变化情况。进一步将c-Re1表达质粒和pGL3-1228*-promoter共转染,观察报告基因的转录活性。采用报告基因检测miR-1228*稳转细胞株的NF-κB转录活性。Western blot检测miR-1228*稳转细胞株E-cadherin和Vimentin的表达情况。采用transwell实验方法观察miR-1228*对SGC-7901迁移的影响。结果：相对于癌旁组织,miR-1228*的表达水平在胃癌组织中明显下调；并且miR-1228*的表达水平和肿瘤大小相关。与阴性对照相比,miR-1228*过表达能明显抑制SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的生长,并减低瘤体的重量。NF-κB的激活剂TNF-α能够抑制miR-1228*启动子区报告基因的荧光强度；NF-κB亚基c-Rel的表达质粒和pGL3-1228*-promoter共转染至SGC-7901,结果发现pGL3-1228*-promoter的表达活性明显受到抑制,抑制的程度大于TNF-α。进一步研究结果显示,miR-1228*稳定转染细胞株的NF-κB转录活性明显降低。miR-]228*能明显上调SGC-7901的E-cadherin蛋白的表达,同时下调Vimentin的蛋白水平。Transwell实验结果显示,miR-1228*可以明显抑制SGC-7901的迁移。结论：miR-1228*在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织。过表达miR-1228*能够抑制SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的生长。miR-1228*与NF-κB之间存在反馈环路。过表达miR-1228*能够抑制SGC-7901的EMT。