乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis,JEV）属于黄病毒科黄病毒属,是一种危害严重的虫媒性人兽共患传染病病原,严重威胁人类的健康,同时也严重影响我国养猪业的发展。JEV具有嗜神经性,其主要的致病原因是引起机体中枢神经系统过度的炎症反应,导致神经元的凋亡和坏死,然而具体的致病机制尚不十分清楚。因此,进一步研究并阐明JEV的致病机理及其在宿主体内的分布规律,才能为该病的防控提供理论依据。本研究通过腹腔注射乙型脑炎病毒P3强毒株,建立JEV感染小鼠模型,利用病理学技术观察JEV感染后不同时间点脑中各部位的病理学变化,利用免疫组织化学技术和原位杂交技术并结合小鼠脑解剖图谱确定JEV感染小鼠后病毒在脑中的动态分布,将JEV定位到神经核团,绘制出JEV在脑中分布的模式图,明确该病毒的分布,进一步研究了该病毒的神经侵嗜性。主要研究内容如下:1 JEV感染小鼠的临床症状对120只6周龄BALB/c雌鼠腹腔注射10~6PFU JEV,小鼠在感染后84h出现被毛蓬松、蜷缩、食欲不振等现象。感染后96h-144h大部分小鼠出现神经症状,表现为弓背、震颤、嗜睡、聚堆、后肢瘫痪、频繁眨眼、原地转圈等,感染组小鼠死亡56只。随后小鼠状态逐渐恢复。感染后504h后,未见任何临床症状,小鼠也不再死亡,饮食、精神状态良好,呈耐过状态。结果表明,JEV感染可导致小鼠出现认知和运动功能障碍。2 JEV感染小鼠的脑组织病理学变化JEV感染后72h内,在所有脑区都未见明显的组织病理学变化。JEV感染后96h,在大脑中主要表现为胶质细胞的增生和血管袖套现象。间脑的病理变化以血管袖套现象为主。脑干的主要病理变化为胶质细胞增生,在中脑的黑质中可观察到血管袖套现象。JEV感染后120h-144h,病变最为严重。在大脑皮层中,可观察到大量胶质细胞增生,大量神经元变性、坏死,亦可见血管袖套现象。在嗅区有胶质细胞结节存在。间脑的病理变化以神经元坏死和胶质细胞增生为主,血管周围有淋巴细胞和中性粒细胞浸润。中脑中有大量神经元坏死和胶质细胞增生,但在血管周围没有炎症反应。延髓和脑桥的病理变化以胶质细胞增生为主,偶尔可见噬神经元现象。JEV感染后192-360h,脑组织的病理学变化逐渐减轻。在大脑、间脑和中脑中,仍可观察到胶质细胞的增生和少量神经元的坏死。在延髓和脑桥中,主要表现为胶质细胞的增生。JEV感染后504h,未见明显的病理学变化。在整个感染过程中小脑未出现明显的组织病理学变化。结果表明,JEV对感染小鼠中枢神经系统的损伤是广泛性的,大脑、间脑、中脑、脑桥和延髓都受到不同程度的损伤,但JEV对小脑的损伤并不明显。3 JEV感染小鼠后在脑内的分布免疫组化结果显示JEV定位于神经元胞质内。最早检测到病毒抗原在感染后72h,病毒存在于延髓的类巨细胞外侧核、外侧网状核和间脑的丘脑腹内侧核、丘脑腹后内侧核、丘脑网状核,被感染神经核团的JEV阳性率低于3%。感染后96h-144h,病毒在脑中呈弥散性分布,大脑皮质、丘脑和中脑黑质的JEV阳性率较高。感染后192h-360h,脑内病毒载量逐渐减少,JEV趋向分布于大脑和丘脑中。感染后504h未能检测到病毒抗原。结果表明,JEV感染小鼠后,小鼠大脑、间脑、中脑、脑桥和延髓都受到不同程度的感染,JEV对大脑皮质、海马、前嗅核、嗅结节、杏仁核和纹状体,间脑的内侧核群、外侧核群、板内核群和丘脑网状核,中脑的黑质和中脑深核,延髓和脑桥的网状结构、旁正中中缝核和三叉神经运动核的感染程度较高。以上结果表明,JEV感染小鼠导致其出现认知和运动功能障碍。脑组织病理变化主要表现为非化脓性脑炎,除小脑外,其余脑区都受到不同程度的损伤。JEV主要定位于神经元胞质中,在脑内呈弥散性分布,对小鼠大脑、间脑、中脑、脑桥和延髓造成不同程度的感染。