论文部分内容阅读
目的:以PPARα信号通路、CYP4A、20-HETE为本研究切入点,探讨其与自发性高血压大鼠肾脏损害之间的关系,并观察针刺对自发性高血压大鼠肾脏组织中PPARα、CYP4A以及血清中20-HETE、血肌酐、血尿素氮等关键因素的影响,探讨针刺干预自发性高血压大鼠及其肾损害的可能机制。方法:选取30只SPF级同源同种10周龄健康雄性自发性高血压大鼠,体重180～220g,另选正常血压SPF级Wistar大鼠10只,体重180～220g。应用SPSS24.0软件将30只自发性高血压大鼠进行随机分组,分为太冲组、曲池组、模型组,正常Wistar大鼠分为正常组。太冲组针刺SHR左侧太冲穴、足三里穴以及合谷穴,90°垂直插入,顺时针均匀提插捻转,行平补平泻手法,留置15分钟,而后逆时针捻转提出。曲池组针刺SHR左侧曲池穴、足三里穴以及合谷穴,操作同前。正常组与模型组大鼠正常固定15分钟,不予以针刺及其他操作。测量治疗前1周、治疗前1天以及治疗28天后血压值。大鼠置于固定器中,待其安静以后,在安静状态下进行操作,反复测量3次,取均值。在第28天针刺治疗结束后,禁食不禁水24h,取材前用5%乌拉坦(1.5g/kg)腹腔麻醉,从腹主动脉抽取血液标本,ELISA法检测血清中20-HETE、血肌酐以及血清尿素氮含量水平;取肾脏组织,采用RT-PCR法检测不同组PPARα、CYP4A1、CYP4A2/3基因表达量;Western-Blot法测定PPARα、CYP4A蛋白的表达;制作肾脏组织切片,使用HE染色观察各组肾脏标本基本形态改变。结果:(1)各组大鼠血压值的比较:治疗前1周与治疗前1天相比,正常组、模型组、太冲组、曲池组血压均无明显变化(P>0.05);治疗4周后,与模型组相比,太冲组、曲池组血压明显降低(P<0.05);治疗前与治疗后,太冲组与曲池组血压明显降低(P<0.05);(2)各组大鼠血清中20-HETE浓度水平比较:治疗4周后,太冲组20-HETE与正常组之间无显著性差异(P>0.05),太冲组20-HETE水平较模型组水平显著性下降(P<0.05)。(3)各组大鼠血清中血肌酐与血清尿素氮含量水平比较:治疗4周后,太冲组、曲池组血肌酐含量与血清尿素氮含量明显低于模型组(P<0.05);太冲组与曲池组相比,血肌酐含量与血清尿素氮含量无明显差异(P>0.05)。(4)各组大鼠PPARα-m RNA、CYP4A1-m RNA、CYP4A2/3-m RNA水平比较:治疗4周后,与模型组相比,太冲组与曲池组PPARα明显上调,太冲组与曲池组CYP4A1、CYP4A2/3-m RNA下调并有显著性差异(P<0.05);与曲池组相比,太冲组CYP4A1、CYP4A2/3-m RNA下调并有显著性差异(P<0.05)。(5)各组大鼠PPARα及CYP4A蛋白表达量的比较:(1)PPARα:治疗4周后,与模型组比较,太冲组与曲池组PPARα蛋白表达量提高并且具有显著性差异(P<0.05);与曲池组相比,太冲组PPARα蛋白表达量无统计学差异(P>0.05);(2)CYP4A:治疗4周后,与模型组比较,太冲组与曲池组CYP4A蛋白表达量下调并且具有显著性差异(P<0.05);太冲组与曲池组相比,CYP4A蛋白表达量对比无统计学差异(P>0.05)。(6)各组大鼠肾脏组织HE染色结果对比:肾组织经HE染色后,正常组Wistar大鼠肾组织中肾小球、肾小管以及肾髓质分布等镜下结构未见明显改变;模型组较正常组,肾组织结构发生较大变化:肾小球出现萎缩,肾小球毛细血管扩张、充血,肾髓质分布不均;太冲组、曲池组肾组织较模型组肾小球萎缩稍有好转,充血情况有所好转,肾髓质分布较模型组均匀且分布较为密集。结论:(1)针刺可有效降低SHR血压;(2)太冲组多项实验指标改善效果均优于曲池组,说明以太冲穴、合谷穴、足三里穴为主穴针刺疗效更佳;(3)针刺可有效降低SHR Scr、BUN含量水平,改善SHR肾脏靶器官损害;(4)针刺可激活PPARα的表达,抑制CYP4A/20-HETE,可能是影响肾脏靶器官损害的机制之一。