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金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SPA)、链球菌(C和G群)蛋白G(Streptococcal protein G,SPG)和大消化链球菌蛋白L(Peptostreptococcus protein L,PPL)是典型的免疫球蛋白结合蛋白。它们能结合大多数哺乳动物的免疫球蛋白,但结合方式和结合谱不同。三种蛋白可以优势互补,不仅有更好的结合能力,还具有更广的结合谱,有很好的应用前景。本研究选取PPL B3结构域进行基因优化,与现有的AG串联基因形成不同拷贝数的AGL基因,连接到p ET-30a(+)原核表达载体中,构建pET-30a(+)-L、pET-30a(+)-AGL、p ET-30a(+)-[AGL]2、p ET-30a(+)-[AGL]3四种重组表达载体。经原核表达系统得到4种重组蛋白即L、AGL、[AGL]2、[AGL]3,均为可溶性表达。经Ni-NTA亲和层析纯化得到的四种蛋白L、AGL、[AGL]2、[AGL]3,其中[AGL]2重组蛋白表达量高而且纯化回收率高。Western blot分析鉴定AGL、[AGL]2、[AGL]3蛋白均能与牛血清发生特异性反应。Westernblot和间接ELISA分析结果显示[AGL]2重组蛋白与可与9种哺乳动物Ig反应,而且结合能力强于[AG]3重组蛋白。对[AGL]2重组蛋白进行HRP标记(过碘酸钠法),经直接ELISA方法测定[AGL]2-HRP有很高的结合兔IgG活性。Dot-ELISA和间接ELISA结果显示[AGL]2酶标蛋白可结合9种哺乳动物Ig,而且[AGL]2酶标蛋白结合人Ig M和人Ig A能力强于[AG]4酶标蛋白。经验证,[AGL]2酶标蛋白可检测兔源免疫抗体;特异性检测牛、犬、鹿、猪、羊血清中的布鲁氏菌病抗体;特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体。随后,以本实验室建立的8BF-ELISA检测FMDV方法为基础,优化各个反应条件,最终建立了可检测牛、猪、羊、鹿的口蹄疫AGL-ELISA方法。应用AGL-ELISA检测了12个牧场904份牛血清,174份猪血清,292份羊血清和80份鹿血清,FMDV阳性率从0~76.19%不等。