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目的:
通过实验检测糖皮质激素诱导骨髓细胞向成脂成骨方向转化的作用,通过体外培养大鼠骨髓基质细胞的方法来研究成脂成骨细胞中DKK-1的表达,为今后的实验提供实验依据。
方法:
Percoll法分离大鼠骨髓基质细胞,通过频繁更换培养液及反复传代的方法纯化细胞。用传至2代细胞作MTT实验,确定成脂成骨细胞诱导液的浓度以减少对细胞的毒性作用。传3代MSC接种于6孔培养板上,共接种26板,分为成脂1、成脂2、成骨1、成骨2及对照组,其中在成脂成骨诱导组(2周)中加入盖玻片以做油红O、钙结节染色及ALP测定,分别在成脂成骨诱导大鼠骨髓基质细胞6小时、24小时、1周、2周后,用RT-PCR法测定细胞中DKK1基因片段含量。
结果:
传3代大鼠骨髓基质细胞成脂成骨诱导2周后,通过油红O、钙结节染色及ALP测定,证明成脂成骨诱导成功,但分别在成脂成骨诱导大鼠骨髓基质细胞6小时、24小时、1周、2周后,没有检测出DKK-1基因片段。
结论:
随着培养条件不同,大鼠骨髓基质细胞可向脂肪细胞或成骨细胞分化,大鼠成骨成脂细胞内不含有DKK-1基因片段或含量极低。