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目的: 5-FU化疗干预结肠癌LoVo细胞系及其荷瘤动物模型,研究化疗干预对其中肿瘤干细胞的比例的影响。在5-FU干预下,通过131I-AC133mAb显像结肠癌肿瘤干细胞,测量肿瘤组织和对侧肌肉(T/M)的比值,评价化疗药对显像效果的影响 方法: 1.Iodogen标记法,按抗体重量(mg)/131I-NaI放射性活度(mCi)=1:20,制备探针131I-AC133mAb,用PD10的柱子纯化标记后的标记物,薄层纸层析法测定标记物1-7天放化纯。 2.细胞水平:MTT试验绘制5-FU对LoVo细胞的增殖抑制曲线,找到合适5-FU浓度。体外细胞5-FU干预,流式细胞检测CD133+肿瘤干细胞的比例变化。 3.肿瘤组织:制备结肠癌LoVo细胞荷瘤裸鼠模型,肿瘤直径约0.8cm时分两组,一组瘤内多点注射0.2ml的2.5μg/ml5-FU,一组瘤内注射0.2ml的生理盐水,共两次,每次间隔两天,观察裸鼠的成瘤能力及肿瘤生长情况。肿瘤直径约1cm时显像,裸鼠尾静脉注射131I-AC133mAb,1-7天行多时点显像,采用感兴趣区法(ROI)获得各时点肿瘤与本底(T/B)的放射性计数比值。显像结束处死两组裸鼠,测量各脏器组织的注射百分剂量率(%ID/g),分析131I-AC133mAb的生物学分布。两组肿瘤组织制备细胞悬液流式细胞检测分析肿瘤干细胞的比例。两组肿瘤组织HE染色,观察肿瘤坏死情况。 4.采用IBM SPSS Statistics19.0软件进行统计分析计量资料,均以95%的置信区间表示。样本均数的比较采用独立样本t检验,P<0.05具有统计学意义。 结果: 1.131I-AC133mAb标记率为75.04%±0.86%(n=4),纯化后,放化纯96.34%±2.23%(n=4),室温放置7天放化纯逐渐降低,第7天70.13%±1.45%(n=4)。 2.细胞水平:MTT试验中5-FU浓度在0.25μg/ml~25μg/ml时,随着药物浓度的增加,细胞存活率下降;5-FU<0.25μg/ml时,细胞存活率稳定88%左右;当5-FU浓度为2.5μg/ml时,肿瘤细胞存活率为50%~60%。2.5μg/ml5-FU处理体外细胞培养,细胞流式检测5-FU组和生理盐水组中CD133+肿瘤干细胞比例分别为41.8%±1.27%(n=4)和36.75%±2.72%(n=4),(t=4.953,P<0.05)差异有统计学意义。 3.肿瘤组织水平结果: 1)荷瘤裸鼠经5-FU两次化疗后,5-FU组和生理盐水组裸鼠体重分别为14.8g±1.15g(n=5)和16.5g±1.80g(n=5),(t=3.984,P<0.05)差异有统计学意义;肿瘤体积分别为0.181cm3±0.127cm3(n=5)和0.234cm3±0.162cm3(n=5),(t=1.735,P>0.05)差异无统计学意义。 2)荷瘤裸鼠131I-AC133mAb显像,瘤体第3天出现显像剂明显浓聚并逐渐清晰。第7天的5-FU组和生理盐水组T/B分别为3.131±1.040(n=5)和2.981±0.928(n=5),(t=3.872,P<0.05)差异有统计学意义。 3)生物分布结果显示两组肿瘤、血液及肝脏组织均有较高的%ID/g值。5-FU组和生理盐水组中肿瘤%ID/g值分别为1.091±0.24(n=4)和0.859±0.40(n=4),(t=2.521,P<0.05)差异有统计学意义;血液%ID/g值分别为4.070±0.62(n=4)和3.317±0.80(n=4),(t=3.637,P<0.05)差异有统计学意义;肝脏%ID/g值分别为1.018±0.46(n=4)和1.662±2.08(n=4),(t=2.578,P<0.05)差异有统计学意义。 4)流式分析,5-FU组和生理盐水组中CD133+肿瘤干细胞比例分别为18.5%±2.27%(n=4)和11.0%±1.63%(n=4),(t=4.423,P<0.05)差异有统计学意义。 结论: 在5-FU的作用下,体外LoVo细胞培养和荷瘤裸鼠肿瘤组织内CD133+肿瘤干细胞比例增高。131I-AC133mAb具有动态监测化疗过程中CD133+肿瘤干细胞存活及富集水平的潜力。