微生物发酵法酶解蛋白及其对黄羽肉鸡生产性能和肠道菌群的影响

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本实验利用枯草芽孢杆菌产蛋白酶特性,优化最佳产酶条件,并添加外源酶降解蛋白生成小肽。将含有益生菌的复合小肽作为蛋白源饲喂肉鸡,检测其生产性能,并用PCR-DGGE技术检测肉鸡肠道菌群变化情况。选取本实验室分离保存的一株芽孢杆菌,经16S rRNA鉴定为枯草芽孢杆菌。用Folin-酚法测定影响细菌产蛋白酶的几种主要因素(温度、起始pH、时间、接种量)在不同条件下对酶活力的影响,根据单因素条件下的测定结果,设计四因素三水平正交实验(L9(34)),确定最佳产酶条件为:温度30℃,起始pH7.5,发酵时间18h,接种量1%。利用芽孢杆菌和外源酶酶解蛋白,并优化外源酶酶解条件(Alcalase添加量、flavourzyme添加量、酶解pH值、酶解时间),根据单因素条件下的测定结果,设计四因素三水平正交实验(L9(34)),确定酶解条件为:Alcalase蛋白酶添加量为0.016AU/g,flavourzyme风味复合蛋白酶添加量达到25LAPU/g,酶解温度为60℃,酶解时间为5h。酶解蛋白产物成品每克含小肽67.53%,氨基氮15.47%,水解度27.65%,芽孢杆菌活菌数1.825×108 CFU/g。将复合小肽按1.2%、0.8%、0.5%、0.3%添加于日粮中饲喂黄羽肉鸡,检测对生产性能影响。结果表明,试验组二(添加0.8%)与对照组相比,总增重高出31.04%,差异极显著(P<0.01);料肉比降低了17.29%,差异显著(P<0.05);腹泻率降低5.95%,差异极显著(P<0.01)。试验组一(添加1.2%)总增重效果差异显著(P<0.05);料肉比差异显著(P<0.05);腹泻率差异极显著(P<0.01)。试验组三、四与对照组相比,总增重和料肉比效果差异均不显著(P>0.05);腹泻率差异极显著(P<0.01)。采集试验效果最佳一组(添加量0.8%)与对照组不同试验周粪样进行肠道菌群组成及多样性分析,结果表明试验初期肠道菌群数量较少,并无规律性。3周时肠道菌群相似性升高,多样性增加。6周时试验组比对照组菌群数量增加18%,并有一条特异性条带出现,表明复合小肽对维持肉鸡肠道菌群稳定,增加菌群多样性方面有明显效果。
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