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研究背景早年应激（early life stress）,又称生命早期应激,是个体在以婴幼儿时期为主的生命早期阶段对遇到的生理、心理等方面的恶性事件所做出的应激反应。国外学者将早年应激事件主要分为以下两类,一类应激事件是在一段时间内持续发生的负性应激事件,如持续的虐待、长时间的冷落、亲人的长期冲突等,另一类应激事件则是短暂但是应激程度巨大的严重恶性事件,如恶劣暴力行为、重大自然灾害等。早年应激一般发生在个体的海马、杏仁核等重要脑区发育的关键时期。生命早期长期暴露于恶性应激事件下会对机体的神经内分泌功能和神经系统的正常发育造成影响,并可能导致大脑组织结构和生理功能的异常,增加成年后患有心理疾病、精神类疾病的风险。中医药治疗抑郁症由来已久,因其具有疗效确切、副作用少、安全性高等优点,近年来应用逐渐广泛。逍遥散是《太平惠民和剂局方》中记载的经典方剂,主要针对由于“肝郁脾虚”的病机,治疗由慢性应激引起的抑郁症疗效显著。研究目的本研究通过PND（postnatal day）1-PND 21的母婴分离造模方法复制了早年应激大鼠模型,通过观察逍遥散药物干预后早年应激大鼠模型的行为学结果,初步明确逍遥散药物干预对早年应激模型大鼠的抑郁样行为的干预作用;通过观察各组大鼠海马组织DG区神经发生的情况,以初步探讨逍遥散对早年应激模型大鼠海马组织神经发生的影响;通过检测海马组织cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的活性,以初步探讨逍遥散药物干预对早年应激模型大鼠海马组织神经发生相关通路的调节机制。研究方法本研究通过PND 1-PND 21的母婴分离造模方法复制了早年应激大鼠模型,在PND 22-PND49对大鼠进行逍遥散悬浊液、阳性对照药物氟西汀悬浊液的灌胃干预。分别在PND21、28、35、42、49测定并记录大鼠体重,分别在PND21和PND49对各组大鼠进行糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验,在PND 49对各组大鼠进行旷场实验的行为学检测,以明确逍遥散可以改善早年应激模型大鼠抑郁样行为。采用免疫荧光染色法观察各组大鼠海马组织DG区Ki67+、DCX+、Neun+的平均光密度值,以初步探讨逍遥散对早年应激模型大鼠海马组织神经发生的影响;再利用ELISA法检测海马组织cAMP的蛋白含量,利用WB检测海马组织PKA、CREB、p-CREB、BDNF的蛋白表达量,利用RT-PCR检测海马组织PKA、CREB、p-CREB、BDNF的mRNA含量,以初步探讨逍遥散对早年应激模型大鼠海马组织cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的调节机制。研究结果1.经过PND 1-PND 21的母婴分离造模方法可以复制早年应激大鼠模型,相比于正常组,经过母婴分离造模刺激后的大鼠活跃程度降低,体重呈现下降趋势,糖水偏好率降低,快感缺失,在强迫游泳实验与悬尾实验中不动时间增长;而PND22-PND49的逍遥散药物干预能够明显改善早年应激模型大鼠的上述抑郁样行为,并且在旷场试验中总移动距离增加,进入中央区的时间和次数增多,证明逍遥散药物干预具有改善早年应激模型大鼠抑郁样行为的效应;2.相比于正常组,模型组大鼠海马组织DG区Ki67+、DCX+、Neun+的平均光密度值明显降低,提示母婴分离造模方法可以通过抑制海马组织DG区神经干细胞的增殖、分化,并减少神经干细胞数量抑制大鼠的神经发生,这可能是母婴分离造模方法复制早年应激大鼠模型抑郁样行为的原因;相比于模型组,逍遥散组大鼠海马组织DG区Ki67+、DCX+、Neun+的平均光密度值明显增加,提示逍遥散可以通过促进海马组织DG区神经干细胞的增殖、分化,增加海马组织DG区神经干细胞的数量,改善早年应激模型大鼠的神经发生,并认为这可能是逍遥散干预改善早年应激模型大鼠抑郁样行为的主要机制之一;3.相比于正常组大鼠,模型组大鼠海马组织中cAMP、PKA、CREB、p-CREB、BDNF的蛋白表达量和mRNA含量相比于正常组均明显降低,表明母婴分离造模方法可以抑制海马组织cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路;相比于模型组,经过PND 22-PND 49的逍遥散和氟西汀药物干预后,两组大鼠海马组织中cAMP、PKA、CREB、p-CREB、BDNF的蛋白表达量和mRNA含量相比于模型组明显增加,说明PND 22-PND 49的逍遥散和氟西汀药物干预可以逆转母婴分离造模方法对海马组织cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的抑制作用,并认为这可能是逍遥散干预改善早年应激模型大鼠海马神经发生的重要机制之一。研究结论逍遥散药物干预具有改善母婴分离造模方法复制的早年应激大鼠模型抑郁样行为的作用,其作用机制可能是通过促进海马组织cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的表达,促进海马组织DG区神经干细胞的增殖和分化,并增加海马组织DG区神经干细胞的数量,改善海马组织的神经发生,从而逆转母婴分离方法复制的早年应激大鼠模型对神经发生的抑制作用,改善早年应激模型大鼠的抑郁样行为。