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目的通过构建小鼠肝大部分切除模型,并给予蒙药古日古木-13,初步探讨其对小鼠肝脏再生的影响,并找寻其可能作用机制。方法1.构建小鼠70%(2/3)肝切除术后肝再生(PH)模型:本实验采用传统大部结扎切除的手术方法,建立小鼠肝脏切除模型,在无菌环境条件下通过腹腔注射5%水合氯醛麻醉小鼠,剪去腹部皮毛并消毒,固定在手术板后沿腹部正中线从剑突横向做约3 cm的切口,充分暴露小鼠肝脏,观察小鼠肝脏的解剖结构是否正常。用手轻轻将小鼠肝左侧叶挤出,轻轻提起,再用眼科剪剪开镰状韧带、肝胃韧带和部分肝左侧冠状韧带,此时肝中叶和左外叶处于基本游离状态。取4.0医用非吸收缝合线,依次结扎小鼠的左外叶、左中叶及右中叶的肝蒂并将其剪下(约切除小鼠原肝脏68%的重量),无菌手术操作,并按层缝合腹部切口后,电烤灯下等待小鼠复苏。小鼠能成功苏醒并活动自由,视为手术成功的标志。2.古日古木-13对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝功能及肝再生的影响:古日古木-13对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响:选择6～8周雄性SPF级昆明小鼠,将小鼠随机分为五组,(1)假手术组;(2)模型组;(3)阳性对照组(硫普罗宁);(4)古日古木-13低剂量(400 mg/kg)组;(5)古日古木-13高剂量(1600 mg/kg)组;各给药组按剂量0.3 ml/20g,一天一次,术前连续给药7 d,术后按照剂量继续给药。除假手术组以同样的手术操作只打开腹腔,不进行肝切除;其余4组行肝大部分切除术。构建小鼠70%(2/3)肝切除模型,造模期间不限食量,正常饮食水。造模结束后小鼠自由恢复活动即模型成功。分别于术后1 d、3 d、5 d、9 d收集血清和肝脏,并记录小鼠体重以及肝重,计算肝指数,观察肝再生情况。(1)通过全自动生化仪测定血清,肝切除术后不同时间点小鼠血清中ALT、AST、ALB及LDH含量,观察药物对小鼠术后肝功能的影响情况;(2)通过组织病理学苏木精-伊红染色法(Haematoxylin-eosin staining,HE),观察小鼠肝切除后各时间点肝脏组织中细胞形态和病理变化,通过免疫组织化学方法检测肝切除小鼠再生肝组织中不同时间点增殖细胞核抗原PCNA和Ki67蛋白的表达水平,观察古日古木-13对小鼠术后肝再生的影响。3.古日古木-13对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响机制:应用蛋白质印迹技术定量检测肝切除各时间点小鼠再生肝组织中信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白的表达情况,初步探讨古日古木-13对肝切除小鼠术后肝脏再生的可能机制。结果1.小鼠70%(2/3)肝切除术后肝再生(PH)模型的建立:先麻醉小鼠,在无菌条件下,开腹依次结扎肝叶,并按层缝合腹部切口,完成一只肝切除小鼠的手术时间为15～20 min。实验在确保每组小鼠存活数量的前提下,小鼠肝切除模型手术的成功率达80%以上,死亡小鼠与手术操作有关。手术成功的小鼠术后能够恢复自由活动,正常饮食,腹部的伤口愈合良好。2.蒙药古日古木-13对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝功能及肝再生的影响:(1)生化结果显示,与假手术组相比,术后模型组小鼠的ALT、AST、LDH升高而ALB减少。通过给予相应剂量的古日古木-13和硫普罗宁后,与模型组比较,给予古日古木-13的小鼠可见AST、ALT和LDH在各时间点有不同程度的下降趋势,ALB含量上调。(2)HE染色结果显示:观察小鼠肝脏组织病理形态,各组小鼠肝脏细胞在术后1～3 d短时间内同样出现细胞水肿、炎症及脂滴;假手术组小鼠可见肝细胞形态正常,肝细胞索排列整齐,肝小叶结构完整较好,未见有变性和坏死区域。模型组小鼠可见大量肝细胞出现变性及空泡状坏死,脂肪变性较为严重同时伴有炎症细胞浸润,肝细胞索排列混乱。与模型组小鼠相比,古日古木-13各治疗组小鼠肝细胞脂肪变性减轻,肝脏损伤得到明显改善。免疫组织化学染色结果显示:PCNA和Ki67主要在肝细胞的核中表达,以棕黄色颗粒的出现为阳性表达。与假手术组比,模型组小鼠PCNA和Ki67蛋白的表达在术后均有不同程度的增加,有统计学意义(P<0.05);在1 d、3 d、5 d与模型组相比,高、低剂量组小鼠肝脏Ki67和PCNA蛋白的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在3 d时高、低剂量组PCNA表达达到峰值。3.蛋白质印迹方法检测肝切除术后肝组织中STAT3蛋白的表达:蛋白质印迹方法检测结果显示,在1 d、3 d、5 d时与假手术组比较,模型组有统计学意义(P<0.05)。在1 d、3 d、5 d时与模型组相比,高剂量组有差异且有统计学意义(P<0.05)。表明给予古日古木-13后,高剂量组再生肝组织内STAT3蛋白表达量明显升高,有统计学意义(P<0.05)。结论通过上述实验数据表明,小鼠70%肝切除模型构建成功,古日古木-13对肝大部分切除术引起的肝损伤有一定保护作用,其机制可能与STAT3蛋白激活有关。