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研究目的:通过高脂饲料联合四氧嘧啶(ALX)腹腔注射建立2型糖尿病(T2DM)小鼠模型,在此基础上对蒙药特格希德格奇(糖尿乐)散治疗T2DM模型小鼠的药效学评价研究,为该方治疗T2DM提供科学依据。研究方法:SPF级昆明雄性小鼠66只,随机分组6只小鼠作为正常对照组,喂养基础饲料。其余60只小鼠采用高脂饲料喂养4周,造模组小鼠给予隔日1次,连续3次腹腔注射ALX120mg/kg(PH=4.4)的四氧嘧啶(Alloxan),建立2型糖尿病小鼠模型,末次注射后第3天,剪尾采血检测基础空腹血糖[(FBG)12小时禁食不禁水]水平,以FBG≥11.1mmol/L作为2型糖尿病模型成功的标志。同时分组成正常组(N=6)和模型组(N=12)(用生理盐水灌胃:)、蒙药特格希德格奇高剂量组1.5ml/10g[(N=12)3g/kg]、蒙药特格希德格奇中剂量组[(N=12)1.5g/kg]、蒙药特格希德格奇低剂量组[(N=12)0.75g/kg]和盐酸二甲双胍组[(N=12)200mg/kg],共6组。各组小鼠连续给药21天(三周)。给药期间,除了正常组给予基础饲料外,其余组均给予高脂饲料喂养,每周尾静脉采血检测各组小鼠空腹血糖(FBG)和体重,观察并记录各组小鼠的状态。实验结束后,先测FBG水平和体重,然后摘眼球取血,断颈处死,取小鼠的胰腺、肝、肾脏、骨骼肌和脂肪组织,检测相关指标。用全自动生化仪分析仪检测小鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,进行胰腺组织HE染色和病理分析,ELISA法检测个组小鼠的血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血清胰岛素()水平FINS和计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),试剂盒法测定小鼠肝、肾(左侧)脏组织抗氧化能力相关指标超氧化物歧化酶(SOD)活力和还原性谷胱甘肽(GSH)含量,蛋白质印迹法(Western)法检测各组小鼠骨骼肌(左后肢腓肠肌)和脂肪Blot(腹网膜脂肪)组织GLUT-4蛋白的表达。研究结果:1.各组小鼠的一般情况:(1)高脂饲料喂养4周时小鼠体重明显增加,成功建立高血脂血症小鼠模型,然后隔日一次,连续3次腹腔注射成功建立2型糖尿病小鼠模型。造模后T2DM模型小鼠空腹血糖平均值是15.785mmol/L。(2)2型糖尿病模型组小鼠精神状态不佳、毛发粗糙、色泽偏黄、饮水量增多、进食量增加、尿量显著增多等糖尿病症状明显,新蒙药特格希德格奇(糖尿乐)散能够模型小鼠上述症状有所减轻。2.各组小鼠的空腹血糖()水平比较:FBG结果表明,在给药前,模型组、阳性药物组、蒙药特格希德格奇高剂量组、中剂量组、低剂量组的FBG水平比正常组高(P<0.05),表示2型糖尿病小鼠模型建立成功。给药三周后,阳性药物组、高剂量组、中剂量组、低剂量组FBG水平比模型组低(P<0.05),表示药物具有降糖效果。蒙药特格希德格奇中剂量组与高剂量组、低剂量组相比较,FBG水平下降程度更高(P<0.05),表示蒙药特格希德格奇中剂量组疗效最佳。3.各组小鼠的血脂比较:模型组的TC、TG、LDL-C值比正常组高(P<0.05),模型组的HDL-C值比正常组低(P<0.05),蒙药特格希德格奇高剂量组、中剂量组、低剂量组的TC、TG、LDL-C值比模型组低(P<0.05),蒙药特格希德格奇高剂量组、中剂量组、低剂量组的HDL-C值比模型组高(P<0.05),表示药物具有抑制TC、TG、LDL-C值上升HDL-C值的作用。蒙药特格希德格奇中剂量组与高剂量组、低剂量组相比较,HDL-C值上升程度更高(P<0.05),表示中剂量组升高HDL-C效果最佳。蒙药特格希德格奇中剂量组与低剂量组相比较,TC值下降程度更多(P<0.05),表示中剂量比低剂量降低TC效果更好。三个不同剂量的蒙药组对TG、LDL-C值的下降作用没有差异(P>0.05)。4.各组小鼠抗炎作用比较:结果表明,模型组的血清IL-6、TNF-α含量比正常组高(P<0.05),蒙药特格希德格奇高剂量组、中剂量组、低剂量组的血清IL-6、TNF-α含量比模型组低(P<0.05),表示药物具有降低血清IL-6、TNF-α含量的作用。蒙药特格希德格奇中剂量组与高剂量组、低剂量组相比较,IL-6、TNF-α含量下降程度更高(P<0.05),表示中剂量组效果最佳。5.各组小鼠血清胰岛素(FINS)水平比较:模型组的FINS水平比正常组高(P<0.05),阳性药物组、蒙药特格希德格奇高剂量组、中剂量组、低剂量组的FINS水平比模型组高(P<0.05),表示药物具有改善2型糖尿病模型小鼠的高胰岛素血症作用。.6各组小鼠的抗氧化能力比较:结果表明,模型组的肝、肾脏SOD活力与肝、肾脏GSH含量比正常组低(P<0.05),蒙药特格希德格奇高剂量组,中剂量组,低剂量组的肝、肾脏SOD,肝、肾脏GSH比模型组高(P<0.05),表示药物具有升高肝、肾脏SOD和肝、肾脏GSH的作用。蒙药特格希德格奇中剂量组与高剂量组、低剂量组相比较,肝、肾脏SOD和肝、肾脏GSH升高程度更高(P<0.05),表示中剂量组效果最佳。7.HE染色病理切片:蒙药特格希德格奇散各剂量干预组的胰腺组织病理改变比模型小鼠组明显减轻。8.各组小鼠GLUT-4蛋白的表达水平比较:利用Western Blot考察骨骼肌和脂肪组织中的GLUT-4蛋白表达水平,蒙药特格希德格奇散各剂量干预组能够促进骨骼肌和脂肪组织中的GLUT-4的表达和转位,从而增加葡萄糖吸收,与模型组比较显著升高。9.各组小鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)比较:结果表明,模型组的HOMA-IR值比正常组高(P<0.05),蒙药特格希德格奇中剂量组与高剂量组、低剂量组相比较下降程度更高(P<0.05),表示蒙药特格希德格奇散具有降低的HOMA-IR值的作用。研究结论:1.持续高脂饲料喂养,并给予腹腔注射四氧嘧啶成功复制备2型糖尿病小鼠模型,该模型适用于2型糖尿病的研究,造模成功率达到66.7%(FBG=15.785mmol/L)。2.新蒙药特格希德格奇(糖尿乐)散降低型糖尿病模型小鼠血糖2、炎症因子、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,改善脂代谢。3.蒙药特格希德格奇散能够减少2型糖尿病模型小鼠胰腺胰岛的损伤,减轻肝、肾脏组织的氧化应激状态。4.蒙药特格希德格奇散提高2型糖尿病模型小鼠的骨骼肌和脂肪组织的GLUT-4的蛋白表达,改善2型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗。