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目的：Notch信号通路对细胞增殖、分化、生长、发育等都具有广泛的影响。全反式视黄酸(ATRA)对人早幼粒细胞性白血病细胞(HL-60)的抑制增殖和诱导分化作用是否与调节Notch信号通路有关尚不清楚。本实验旨在通过RNA干扰(RNAi)探索Notch4信号通路在ATRA干预HL-60细胞增殖分化中的作用，为临床上急性早幼粒细胞性白血病(APL)的治疗提供新的分子靶点。
方法：①设计合成靶向抑制Notch4基因的短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体；RNA干扰组通过LTX转染试剂介导转染HL-60细胞，沉默Notch4基因；同时设未干扰组和空质粒组以资对照；②用不同剂量(1μM、0.3μM和0.1μM)ATRA诱导HL-60细胞96h，药物空白组加入等体积的培养基；③通过RT-PCR检测Notch4 mRNA表达，检测特异shRNA对Notch4基因的沉默效应；④通过流式细胞仪(FCM)检测HL-60细胞CD11b、CD14及HLA-DR的表达，以比较Notch4基因沉默对ATRA诱导HL-60细胞分化表型的影响。
结果：①0.1μM、0.3μM和1μM ATRA诱导组HL-60细胞中，与对照组相比，各剂量组CD11b+细胞百分率分别为(8.72±6.68)％、(11.08±7.20)％和(14.19±5.55)％，CD11b+细胞百分率明显增加(均P<0.05)，且随剂量增加而增加(P<0.05)；除1μM组CD14+细胞的百分比明显增加外(27.63±6.77)％，(P<0.05)，其余剂量组尽管呈升高趋势，但与对照组((22.86±4.43)％)比较无明显差别(P>0.05)；各剂量诱导组HLA-DR+细胞百分率的变化与CD14的表达相似，仅1μM组的阳性率((5.92±4.78)％)明显升高(P<0.05)；②shRNA干扰组Notch4mRNA表达(0.0836±0.017)明显低于未干扰组(0.2048±0.021)和空质粒对照组(0.1966±0.024)，(均P<0.01)；③shRNA干扰组HL-60细胞经ATRA诱导后，ATRA各剂量组CD11b+和HLA-DR+细胞百分率均比未干扰组和空质粒对照组中的相应剂量组明显增加(均P<0.05)；干扰组中ATRA 1μM组的CD14+细胞百分率较两对照组中的ATRA 1μM组明显升高(P<0.05)；RNA干扰组内的ATRA各剂量组CD11b和HLA-DR细胞百分率均随ATRA剂量增加而增高(P<0.05)。
结论：特异shRNA沉默HL-60细胞Notch4基因后，可促进ATRA诱导APL细胞分化表型的成熟，表明干扰Notch4基因可能会成为治疗APL新的分子靶点。