【摘 要】
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目的:本研究为骨科康复中针对T2DM骨再生的基础研究,通过探究在高糖高脂微环境下晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)对骨再生中破骨细胞(Osteoclast,OC)生成及其功能的影响,进一步分析AGEs在T2DM骨再生中的作用机制。AGEs有望作为一种新的治疗靶点应用于T2DM骨延迟愈合的康复治疗中,为临床上促进T2DM骨再生的康复治疗提供
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目的:本研究为骨科康复中针对T2DM骨再生的基础研究,通过探究在高糖高脂微环境下晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)对骨再生中破骨细胞(Osteoclast,OC)生成及其功能的影响,进一步分析AGEs在T2DM骨再生中的作用机制。AGEs有望作为一种新的治疗靶点应用于T2DM骨延迟愈合的康复治疗中,为临床上促进T2DM骨再生的康复治疗提供新思路。方法:(1)利用50ng/m L的核因子κB配体(RANKL)受体激活剂、20 ng/m L的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外定向诱导小鼠RAW264.7细胞分化为OC,诱导实验分为五组:低糖诱导组;高糖高脂诱导组;高糖高脂+AGEs(早期干预)诱导组;高糖高脂+AGEs(晚期干预)诱导组;高糖高脂+AGEs(全程干预)诱导组。(2)用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色方法对诱导后五组生成的OC进行鉴定和细胞计数;(3)用细胞增殖检测试剂盒(CCK8)检测不同时间点(第1天至第4天)各组RAW264.7细胞的增殖活性;(4)将RAW264.7细胞接种在骨吸收板上进行诱导培养,通过计算形成的骨吸收陷凹的面积大小来评估各组OC的骨吸收能力;(5)用蛋白印迹方法(Western blot)检测不同诱导条件下生成的OC中TRAP、CTSK、MMP-9、SDF-1功能蛋白的表达水平。结果:(1)RAW264.7细胞诱导实验中,AGEs在高糖高脂微环境下能显著增加RAW264.7细胞分化为TRAP+OC的数目;(2)CCK-8检测结果:第2、3、4天,AGEs在高糖高脂微环境下能增加RAW264.7细胞分化为OC的增殖活性;(3)骨吸收实验中,高糖高脂+AGEs(全程干预)诱导组骨吸收陷凹的面积显著大于其余各组,且较高糖高脂+AGEs(晚期干预)诱导组,高糖高脂+AGEs(早期干预)诱导组骨吸收陷凹的面积显著增多;(4)Western blot结果显示高糖高脂+AGEs(全程干预)诱导组的TRAP、MMP-9、CTSK、SDF-1的表达水平显著升高。结论:(1)AGEs能促进高糖高脂微环境下OC的生成和增殖活性;(2)AGEs能促进高糖高脂微环境下OC的骨吸收,AGEs早期的干预比晚期的干预效果更明显;(3)AGEs在高糖高脂微环境下通过增加TRAP、MMP-9、CTSK及SDF-1的表达进而提高OC的骨吸收能力。
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