白头翁汤对人食管癌细胞恶性表型及EGFR-PLC-γ1-PKCα信号通路的影响

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目的:
  研究白头翁汤其对人食管EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞增殖、浸润、迁移和克隆形成的抑制,对细胞周期和EGFR-PLC-γ1-PKCα信号通路的影响,以探索白头翁汤抑制管癌细胞生长的机理,为中医临床治疗提供参考。
  方法:
  1.根据《伤寒论》原方配伍,制备白头翁汤及其拆方水煎和醇提液。
  2.运用撤药分析,结合MTT法检测白头翁汤及其拆方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞的活性的抑制作用,优选出疗效最佳组方,并进一步研究不同时间点最佳组方对食管癌四种细胞活性的影响。
  3.使用RTCADP分析仪,检测最佳组方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞增殖、迁移和浸润的影响。
  4.运用软琼脂克隆技术,分析最佳组方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞克隆形成的影响。
  5.运用流式细胞术,检测最佳组方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞分裂周期的影响。
  6.运用westernblot技术,分析最佳组方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞中EGFR、PLC-γ1、PKCα蛋白表达的影响。
  结果:
  1.水煎和醇提白头翁汤及其拆方对人食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞活性均有抑制作用,且以全方抑制作用最强,存在明显的量效依赖关系,全方药物对细胞增活性的抑制作用随着时间的增加而增强。
  2.RTCA-DP分析仪记录结果显示,与空白组对比,水煎和醇提白头翁汤全方均能不同程度抑制食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞的增殖、迁移、浸润。
  3.与空白组相比,水煎和醇提两种方法制备的白头翁汤全方均能使食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞形态有明显的改变。
  4.与空白组相比,水煎和醇提白头翁汤全方能抑制食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞克隆形成。
  5.流式细胞仪分析结果显示,水煎和醇提白头翁汤全方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞周期均有影响,食管癌EC-1、EC9706和Eca109细胞的G1期细胞显著增加,S期、G2期细胞明显减少;食管癌TE-1细胞的S期增加,G1期减少G2期不变。
  6.在白头翁汤全方IC50浓度药物作用细胞后,与空白组比较,食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞中EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达水平下降。
  结论:
  1.白头翁汤全方药物具有协同抗食管癌作用,对人食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞活性的抑制作用与药物剂量和作用时间呈正相关。
  2.水煎和醇提白头翁汤全方对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞的增殖、浸润、迁移及克隆形成均有抑制作用。
  3.白头翁汤全方可能通过改变细胞形态和阻滞细胞周期达到对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞增殖的抑制作用。
  4.白头翁汤全方阻滞食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞周期可能与下调EGFR-PLC-γ1-PKCα信号通路蛋白的表达有关。
  5.食管癌细胞恶性表型及EGFR-PLC-γ1-PKCα蛋白表达的增强与食管癌热毒互结和湿浊困阻病机相关。
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