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目的探讨CYP1A1启动子区CpG岛甲基化与抗结核药物性肝损伤(antituberculosis drug-induced hepatic injury,ADIH)的关系以及5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-Cd R)对ADIH的作用。方法将HL-7702细胞分为对照组、异烟肼组(INH)、利福平组(RFP)、吡嗪酰胺组(PZA)、两药联合组(INH+RFP)、三药联合组(INH+RFP+PZA)。首先,以不同浓度的抗结核药作用肝细胞24h,采用CCK8法检测各组药物对细胞存活率的影响,来确定不同种类抗结核药的浓度。其次,依据上述确定的各组药物浓度处理肝细胞,均培养6h、12h、24h,赖氏法检测不同药物组各时间点LDH、SOD、MDA的变化;以荧光PCR(q RT-PCR)法检测CYP1A1 m RNA表达变化,并将CYP1A1 m RNA与LDH、SOD、MDA水平进行相关性分析;选取CYP1A1 m RNA变化最大时间点,采用甲基化测序法检测不同抗结核药处理后CYP1A1启动子区CpG岛甲基化情况。最后,采用5-Aza-Cd R干预肝细胞后,以荧光PCR(q RT-PCR)法检测CYP1A1和DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)m RNA表达,MSP法检测不同种类抗结核药CYP1A1启动子区CpG岛甲基化状态,ELISA检测CYP1A1蛋白、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白和酶活性的变化,赖氏法检测法LDH、SOD、MDA水平变化。结果依据细胞存活率,确定了各组药物浓度分别为800μg/ml INH、300μg/ml RFP、500μg/ml PZA、50μg/ml+100μg/ml(INH+RFP)、85.5μg/ml+427.5μg/ml+171μg/ml(INH+RFP+PZA)。用上述各药物浓度培养细胞6h、12h、24h后,发现反映肝细胞损伤的指标LDH、SOD、MDA均发生异常改变,各药物组LDH、MDA明显上升,SOD显著下降,均在24h达到最大变化(P<0.01),且三药联合组的变化幅度最大(P<0.01),提示不同种类抗结核药均可导致肝细胞损伤,且三药联合损伤更重。细胞经INH、PZA、两药联合、三药联合处理后,CYP1A1 m RNA表达水平均呈先下降后回升的趋势,均在12h下降到最低值(均P<0.05),且三药联合下降幅度最大;而RFP处理后是呈先升高后下降趋势,且24h达到最低值;以上结果提示,INH、PZA、两药联合、三药联合致肝损伤过程中,CYP1A1发生低表达。CYP1A1的低表达可能受启动子区甲基化调控,进一步对各类药物CYP1A1启动子区CpG岛甲基化测序,结果表明,INH、PZA、两药联合、三药联合组CYP1A1启动子区甲基化率均升高(均P<0.05),三药联合组甲基化率高于两药联合组;RFP组甲基化率虽升高,但无统计学意义(P>0.05),以上结果提示,INH、PZA、两药联合、三药联合致肝细胞损伤中,CYP1A1的低表达可能受其启动子区高甲基化调控。针对上升各组的甲基化变化,观察加入甲基化抑制剂5-Aza-Cd R处理后的效果;MSP结果显示,加入抑制剂后,INH、PZA、两药联合、三药联合组CYP1A1启动子区CpG岛甲基化率降低,且三药联合组降低最显著。同时,CYP1A1蛋白和m RNA表达水平均升高,蛋白比m RNA表达水平升高更明显,且三药联合组加入抑制剂后CYP1A1 m RNA及蛋白的表达变化最显著(P<0.01),提示5-Aza-Cd R抑制CYP1A1基因甲基化促进其表达。结论CYP1A1启动子区CpG岛高甲基化调控CYP1A1低表达,可能与抗结核药物致肝细胞损伤有关。5-Aza-Cd R可通过去甲基化作用升高CYP1A1表达,在一定程度上缓解药物性肝细胞损伤。