【摘 要】
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目的:前期研究证实,位于线粒体外膜上VDAC1蛋白介导了mPTP的开放,白藜芦醇可以影响VDAC1的活性。但具体机制尚不清楚。本实验的目的在于研究白藜芦醇预处理对A/R损伤后的H9c2
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目的:前期研究证实,位于线粒体外膜上VDAC1蛋白介导了mPTP的开放,白藜芦醇可以影响VDAC1的活性。但具体机制尚不清楚。本实验的目的在于研究白藜芦醇预处理对A/R损伤后的H9c2心肌细胞VDAC1蛋白磷酸化的影响以及与Akt-GSK3β通路的关系。方法:本实验用H9c2细胞株为实验对象,模拟体内缺血再灌注损伤模型,构建缺氧复氧损伤模型。采用免疫印迹(Western Blotting)法检测phospho-Akt(Ser473)、Akt、phospho-GSK3β(Ser9)、GSK3β、VDAC1蛋白的表达;免疫共沉淀(Co-ip)法和Western Blotting法检测VDAC1磷酸化蛋白水平,以及HK2、Bax与VDAC1的结合;分光光度法测定CPK、LDH的活性;线粒体膜电位(Δψm)、活性氧(ROS)和细胞凋亡由流式细胞仪测定。结果:1.A/R损伤后,p-VDAC1、VDAC1蛋白表达量较正常组显著上调,Bax与VDAC1蛋白结合量增加;p-Akt(Ser473)、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达量明显降低,HK2与VDAC1蛋白结合量大量减少(p<0.01);2.白藜芦醇预处理后,p-VDAC1蛋白较A/R组明显下调,Bax与VDAC1蛋白结合量大幅降低;p-Akt(Ser473)、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达量较A/R组显著上调,HK2与VDAC1蛋白结合量明显增加(p<0.01);3.与白藜芦醇预处理组比较,加入Akt特异性抑制剂Akt inhibitor IV后明显抑制AKT-GSK3β通路,VDAC1磷酸化水平明显上升,CPK和LDH活性显著升高,细胞内ROS大量爆发,Δψm稳定性显著下降,细胞凋亡数明显增多(p<0.01)。结论:白藜芦醇预处理通过激活Akt-GSK3β通路降低VDAC1蛋白磷酸化水平,从而抑制线粒体凋亡通路,对抗心肌缺氧复氧损伤。
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