论文部分内容阅读
目的：通过研究肌肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制以及迁移和侵袭抑制现象，探讨肌肽的可能作用机制。 方法：通过MTT实验分别检测实验组及对照组细胞的存活率；细胞平板克隆形成实验分别检测各分组细胞的克隆形成数；细胞划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验分别检测各组细胞的迁移和侵袭能力；实时荧光定量PCR法检测目的基因（PTBP1、PKM1、PKM2和MTA1）mRNA的转录水平；Western blot检测丙酮酸激酶PKM1和PKM2、肿瘤转移相关蛋白MTA1的表达水平。应用GraphPad PRISM6.0软件及SPSS23.0软件进行统计学分析。 结果：1、MTT实验结果显示，不同肌肽浓度（12.5mM、25mM、50mM和100mM）处理24、48和72h后，乳腺癌细胞的存活率随浓度的增大而降低（F=4.852，P＜0.05），具有一定的浓度依赖，但是与时间的关系并不显著（F=1.825，P＞0.05），并且经统计学分析发现时间与肌肽浓度之间并不存在交互效应（F=1.829，P＞0.05）。2、细胞平板克隆形成实验结果显示，人乳腺癌MCF-7细胞经肌肽处理后，与对照组相比可以发现细胞克隆集落数明显减少（F=746.5，P＜0.05），各组平板克隆集落数分别为：25mM组克隆集落数为135.00±6.40，50mM组为62.00±7.97，100mM组为7.4±1.34，对照组为223.60±11.35。3、Transwell迁移实验结果数据显示，对照组和实验组（25mM、50mM和100mM）平均穿过小室膜的细胞数分别为313.00±23.35、220.60±21.54、132.40±7.77和90.80±5.50个，实验组平均穿膜细胞数量较对照组平均穿膜细胞数显著减少，差异具有统计学意义（F=177.20，P＜0.05）。4、Transwell侵袭实验结果显示，空白对照组和实验组（25mM、50mM和100mM）平均穿膜细胞数分别为258.60±21.93、178.40±11.26、123.40±13.72和63.60±13.50个，经统计分析后发现，各组间的穿膜细胞数差异明显（F=140.6，P＜0.05）；与对照组相比较，实验组的穿膜细胞数均明显减少，且随着肌肽浓度增高，穿膜细胞数随之下降（P＜0.05）。5、细胞划痕愈合实验结果显示，空白对照组、25mM组、50mM组和100mM组细胞愈合率分别为0.46±0.02、0.36±0.02、0.27±0.05和0.03±0.02，显著抑制乳腺癌细胞的划痕愈合率（F=99.20，P＜0.05）。6、实时荧光定量PCR结果显示，乳腺癌细胞经肽处理24h后，PTBP1，PKM2和MTA1mRNA转录水平明显降低（P均＜0.05），而PKM1的相对转录水平则相对于对照组而言则明显增加（P＜0.05）。7、Western blot结果显示，肌肽处理24h后，与对照组相比较，实验组细胞内的PKM1蛋白表达水平上调，而PTBP1，PKM2、和MTA1蛋白表达则下调（P均＜0.05）。 结论：1、肌肽显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的分裂增殖，其抑制增殖作用可能与PTBP1和PKM2蛋白下调以及PKM1蛋白上调相关。2、肌肽的迁移及侵袭抑制作用可能与肿瘤转移相关蛋白MTA1的下调有关。