【摘 要】
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目的：
本实验拟研究在高糖诱导人晶状体上皮细胞向间质转分化的过程中,JAK-STAT通路的作用及AG490对此过程的影响。
研究方法：
低糖(5.5mM)DMEM培养液体外培养
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目的：
本实验拟研究在高糖诱导人晶状体上皮细胞向间质转分化的过程中,JAK-STAT通路的作用及AG490对此过程的影响。
研究方法：
低糖(5.5mM)DMEM培养液体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01/04。高糖(30.5mM)处理细胞,按照是否加入AG490及其浓度的不同分为实验组和对照组。
1、CCK-8试剂盒检测晶状体上皮细胞的活性,选择适当的AG490的作用浓度和作用时间;
2、细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;
3、RT-PCR方法半定量检测TGF-β1、FN、α-SMA的mRNA表达量变化。
结果：
随着AG490浓度(10、25、50、100μM)的增加和处理时间(6、12、24、48、72h)的延长,细胞活性呈下降趋势,都未达到LD50,后续实验选择实验组AG490浓度为10和50μM,处理时间分别为6、12、24和48小时。随着时间的延长,各组划痕的闭合程度和转分化标志物的表达量都有所不同,在不同的处理时间(6、12、24、48h),高糖组与低糖组相比,细胞的迁移能力增加(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表达量增高(P＜0.05);AG490组与HG组相比,细胞的迁移能力降低(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表达量下降。其中AG50组与高糖组相比,TGF-β1、FN、α-SMA的相对表达量在各时间点差异显著(P＜0.05);AG10组与高糖组相比,TGF-β1的相对表达量在12、24和48小时差异显著(P＜0.05),在6小时差异不显著(P＞0.05);FN的相对表达量在6、12、24和48小时差异显著(P＜0.05);α-SMA的相对表达量在48小时差异显著(P＜0.05),在6、12和24小时差异不显著(P＞0.05)。
结论：
JAK-STAT通路通过影响TGF-β1和细胞外基质转录表达参与了高糖诱导的人晶状体上皮细胞向间质转分化的过程。JAK抑制剂AG490对此过程有抑制作用,且随着AG490浓度的增加其抑制作用增强。
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