噬菌体AbTJ的分离、鉴定及其受体结合功能模块的应用研究

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鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是一种革兰式阴性菌,属于专性需氧的条件致病菌,广泛分布于自然界和人体中,可引起重症肺炎、脑膜炎、败血症以及皮肤和泌尿系统的感染,由于缺乏对多重耐药鲍曼不动杆菌准确、快速的检测方法,其临床干预受限。噬菌体特异性强且数量丰富,因此噬菌体及其受体结合模块对细菌的特异性识别作用重新受到人们的关注。
  本研究以实验室前期分离的多重耐药鲍曼不动杆菌MDR-TJ作为宿主菌,从下水道未经处理的污水中分离得到一株噬菌体AbTJ。电镜观察噬菌体AbTJ的形态学特征为有尾噬菌体目(Caudovirales Order)、短尾病毒科(Podoviridae Family)噬菌体。宿主谱实验表明其宿主专一性较强,一步生长曲线显示噬菌体AbTJ的吸附潜伏期约为90min,裂解量约50pfu/cell。低温对该噬菌体效价几乎没有影响,可以低温保存,且该噬菌体的最适pH值为7.0。同时适量的二价阳离子对该噬菌体侵染宿主具有促进作用。全基因组测序分析表明AbTJ是由42670bp组成的环状双链DNA分子,包含62个编码序列(CDSs),其中13个编码序列可预测其功能,49个编码序列为假定蛋白。基因组比较显示,噬菌体AbTJ与鲍曼不动杆菌噬菌体Ab105-1phi(KT588074)亲缘关系最近。
  在完成噬菌体的分离、鉴定和生物信息分析的基础上,本研究还人工合成了鲍曼不动杆菌噬菌体AbTJ的两种尾丝蛋白gp52和gp53的DNA序列,表达纯化两种尾丝蛋白并验证了它们的生物活性。研究结果表明:两种尾丝蛋白均没有内源性的裂解活性,且在种水平上能特异性的识别鲍曼不动杆菌。最后以共价偶联方式将尾丝蛋白标记到磁珠上,建立特异性检测鲍曼不动杆菌数量的生物发光检测方法,并应用于葡萄糖、尿液、粪便、痰液和生活污水中的鲍曼不动杆菌检测,其中测试样品的菌回收率均在50%以上,相对标准偏差(RSD)值均在6%以下。这项研究不仅增加了我们对鲍曼不动杆菌噬菌体的认识,还为临床检测和治疗鲍曼不动杆菌提供了新的思路和方法依据。
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