茜草制诃子对免疫抑制中国黄羽鹌鹑胸腺形态结构及T-bet/GATA-3表达量的影响

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诃子(Terminalia chebula Retz,TC)是使君子科植物诃子或者绒毛诃子的干燥成熟的果实。作为诃子炮制品的茜草制诃子(Rubia cordifolia L.processed Terminalia chebula Retz,RTC)是诃子经过茜草灰及麦酒炮制后得到的平息方剂。中国黄羽鹌鹑具有很高的养殖以及实验学价值,是我国养殖规模仅次于鸡、鸭的禽类,目前关于茜草制诃子对于胸腺影响的研究未见报道。本研究旨在探索茜草制诃子对环磷酰胺所致的免疫抑制中国黄羽鹌鹑胸腺形态结构及T-bet/GATA-3表达量的影响。为茜草制诃子的进一步拓展开发应用提供依据,为将茜草制诃子作为一种中草药免疫增强剂在畜禽养殖业的扩展应用提供理论支撑。本实验以茜草制诃子为研究对象,诃子为对照,将160只21日龄健康中国黄羽鹌鹑随机分成8组,分别为空白组、环磷酰胺组、诃子及茜草制诃子高中低剂量组,高中低剂量分别为4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg,每组20只动物。实验期为10 d,第1~3天,除空白组外,其他各组按每只80 mg/kg剂量肌注环磷酰胺,空白组注射等量生理盐水。第4~10天,诃子组及茜草制诃子组分别按高中低剂量灌胃相应药物,空白组与环磷酰胺组灌胃等量生理盐水。实验期间进行临床观察并记录监测体重变化,实验结束后进行解剖、HE染色、TUNEL染色、流式细胞术、荧光定量PCR等实验,其结果如下:解剖结果:环磷酰胺组胸腺与空白组相比体积缩小。诃子组中,诃子1 g/kg组胸腺状态优于诃子2 g/kg组及诃子4 g/kg组;茜草制诃子组中,2 g/kg组胸腺状态优于1g/kg组与4 g/kg组,体积稍大,但不及空白组。其中空白组的胸腺指数极显著(P<0.01)高于环磷酰胺组,其长径与宽径也均极显著(P<0.01)大于环磷酰胺组;2g/kg与4 g/kg的茜草制诃子组胸腺指数极显著(P<0.01)高于环磷酰胺组胸腺指数,且2 g/kg茜草制诃子组长径与宽径显著(P<0.05)大于环磷酰胺组。HE染色结果显示:比较各组胸腺皮髓质比,结果显示环磷酰胺组>茜草制诃子4 g/kg组>空白组>茜草制诃子2 g/kg组>茜草制诃子1 g/kg组>诃子4 g/kg组>诃子2 g/kg组>诃子1 g/kg组;且诃子1 g/kg组与诃子2 g/kg组皮髓质比均极显著(P<0.01)低于环磷酰胺组,而茜草制诃子2 g/kg组皮髓质比显著(P<0.05)低于环磷酰胺组。比较各组别胸腺小体个数,其结果显示空白组>茜草制诃子2 g/kg组>诃子1g/kg组>茜草制诃子4 g/kg组>茜草制诃子1 g/kg>诃子2 g/kg组>诃子4 g/kg组>环磷酰胺组。其中空白组、诃子1 g/kg组及茜草制诃子2 g/kg组胸腺小体数量极显著(P<0.01)多于环磷酰胺组。胸腺细胞凋亡结果:TUNEL染色实验结果显示,各组别阳性细胞数为:环磷酰胺组>诃子4 g/kg组>诃子2 g/kg组>茜草制诃子1 g/kg组>茜草制诃子4 g/kg组>诃子1 g/kg组>茜草制诃子2 g/kg组>空白组。环磷酰胺组的阳性细胞数相较空白组呈极显著(P<0.01)上升,1 g/kg诃子组、2 g/kg与4 g/kg的茜草制诃子组与环磷酰胺组对比而言,阳性细胞数均呈极显著(P<0.01)降低,其它组别的阳性细胞数均低于环磷酰胺组。流式细胞术测得的凋亡率结果显示诃子组与茜草制诃子组的凋亡率均介于空白组与环磷酰胺组之间,其中空白组凋亡率显著(P<0.05)低于环磷酰胺组。流式各组别趋势与TUNEL实验组间趋势一致,二者相互印证。荧光定量PCR结果:2 g/kg茜草制诃子可显著(P<0.05)上调T-bet的表达量,而2 g/kg诃子则显著(P<0.05)上调了免疫抑制中国黄羽鹌鹑的GATA-3表达量,空白组GATA-3的相对表达量也显著(P<0.05)高于环磷酰胺组。其余各组别T-bet与GATA-3表达量均不同程度优于环磷酰胺组。比较各组T-bet及GATA-3的相对表达量:空白组>茜草制诃子2 g/kg组>诃子1 g/kg组>茜草制诃子4 g/kg组>茜草制诃子1 g/kg组>诃子2 g/kg组>诃子4 g/kg组>环磷酰胺组。以上结果表明,诃子及茜草制诃子均能对于环磷酰胺造成的中国黄羽鹌鹑胸腺免疫抑制均有一定的恢复作用。相比而言作为炮制品的茜草制诃子作用优于诃子,且在本实验所设计剂量梯度的中剂量(茜草制诃子2 g/kg组)治疗效果最好。
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