近年来,水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)给安徽省的水稻生产造成了严重经济损失。本研究从安徽省各个水稻产区采集症状明显的水稻病叶,克隆了17个RSV安徽分离物的CP基因和12个RSV安徽分离物的NS3基因,并对其进行了序列分析,以期明确安徽省RSV的起源和演化关系以及为安徽省水稻品种的抗病性鉴定提供理论依据。并进一步构建RSV马鞍山分离物NS3基因的植物表达载体鉴定其沉默抑制子功能。1. RSV安徽分离物CP基因和NS3基因的克隆从感染RSV的水稻病叶中提取总RNA,用设计的特异性引物进行RT-PCR扩增,获得17个RSV安徽分离物包含CP基因的RNA3部分片段和12个包含NS3基因的RNA3部分片段,克隆并测序。序列分析表明,包含CP基因的RNA3片段全长1051个核苷酸,其中17个CP基因全序列均为969核苷酸,编码322氨基酸;包含NS3基因的RNA3片段全长869-897个核苷酸,其中12个NS3基因全序列均为696核苷酸,编码211个氨基酸。2. RSV安徽分离物CP基因的序列分析将17个RSV安徽分离物的CP基因与其它来源的75个RSV CP基因进行核甘酸序列相似性比较,结果表明,17个安徽CP基因间的序列相似性为97.9%-99.2%;与邻近省份江苏、山东、河北、河南的RSV分离物的序列相似性最高,达98.2%-99.7%,而与云南分离物的序列相似性最低,为93.4%-94.4%。构建的系统关系树显示,92个CP基因序列可聚成2个组,来源于华东各省为主的其它省市的CP基因和日本的CP基因聚成一个组,安徽17个CP基因均聚在这一组中,而来源于云南的CP基因聚成另一个组。3. RSV安徽分离物NS3基因的序列分析将12个RSV安徽分离物的NS3基因与其它来源的58个RSV NS3基因进行核甘酸序列相似性比较,结果表明,12个安徽NS3基因序列间的相似性为96.4%-98.7%,与邻省河北、江苏、山东RSV分离物的序列相似性最高,达97.0%-99.5%,而与云南分离物的序列相似性最低,为91.0%-93.9%。构建的系统关系树显示,70个NS3基因序列可聚成2个组,来源于华东各省为主的其它省市的NS3基因和日本的NS3基因聚成一个组,安徽12个NS3基因均聚在这一组中,而来源于云南的NS3基因聚成另一个组。4. RSV马鞍山分离物NS3基因的植物表达载体构建以RSV马鞍山分离物RNA3部分片段为模板,设计特异性引物进行RT-PCR扩增,获得NS3片段,连接到克隆载体上,转化并筛选阳性克隆。再将克隆载体上NS3片段亚克隆到pBin 438和TRV RNA2上,获得的植物表达载体分别命名为pBin 438-NS3和TRV RNA2-NS3。5.表达载体以根癌土壤杆菌介导进行局部沉默试验表达载体pBin 438-NS3转入根癌土壤杆菌,与含有35S: GFP的根癌土壤杆菌共浸润16c本氏烟叶片。6天后,在UV灯下观察到叶片浸润部位有较明显的绿色荧光激发,表明NS3蛋白为一沉默抑制子。6.表达载体以根癌土壤杆菌介导进行回复试验表达载体TRV RNA1和TRV RNA2-NS3分别转入根癌土壤杆菌,共浸润已发生系统沉默的16c本氏烟叶片,30天后在UV灯下观察到NS3蛋白不能回复已建立的沉默。