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目的研究发现,氧化应激与重性抑郁症（Major depressive disorder,MDD）和阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）等神经系统疾病密切相关。本研究中,我们拟研究Sirt-1是否可能通过调节FOXO或p53来保护神经细胞免受氧化应激。应用SK-N-SH细胞研究Sirt-1表达对神经细胞生理功能的影响。本研究首次确定Sirt-1可能通过其脱乙酰反应调节p53,清除氧化应激诱导的ROS,证明Sirt-1和氧化诱导的ROS在AD及相关疾病进展中的重要性。方法以人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞为研究对象,经由Sirt-1基因沉默/过表达处理,同时设立对照,比较各组Sirt-1表达差异,进而分析Sirt-1对神经细胞SK-N-SH的周期进程、增殖、凋亡的影响,探索其可能的机制。通过RT-PCR、Western blotting、荧光素酶报告实验、软琼脂集落形成实验、EDU染色等实验方法,明确Sirt-1及p53之间的关系,p53改变是否可以改变下游基因的表达,分析这种改变,对SK-N-SH细胞的生长和细胞周期进程的影响。进一步证实Sirt-1是否通过调控p53影响细胞增殖,选用SK-N-AS（p53缺失）细胞,分析Sirt-1能否影响SK-N-AS细胞增殖,进一步明确Sirt-1及p53在细胞的生长和细胞周期进程中的关键作用。将200μM H2O2（过氧化氢）,用于本实验,诱导细胞产生氧化应激（OS）,分析、探索氧化应激,是否会抑制p53的转录活性,促使Sirt-1在SK-N-SH细胞中过表达。探索Sirt-1过表达,对细胞凋亡（氧化应激诱导的）的抑制作用及机制。结果Sirt-1基因沉默,能够引起SK-N-SH细胞,G1/G0期的细胞数量,明显下降,S期细胞数量上升,可以观察到G2/M 期阻滞,同 Scrambled组（对照组）比较,差异具有显著意义（P＜0.05）;相反,Sirt-1基因过表达可以导致SK-N-SH细胞G1/G0期细胞显著增加。EdU结果显示,与Scrambled组相比,Sirt-1基因沉默（shSirt-1组）EdU 阳性细胞数明显减少,差异具有显著意义（P＜0.05）,细胞增殖受抑制;而Sirt-1基因过表达可以使SK-N-SH细胞EdU 阳性细胞数明显增加,进一步证实Sirt-1参与了 SK-N-SH细胞增殖整个进程,具有显著的作用。在Western blotting实验中,各组数据结果提示,在SK-N-SH细胞中,p53、FOXO1蛋白含量,既不受Sirt-1基因沉默的影响,也不受其过度表达的影响。双荧光素酶报告显示,Sirt-1基因沉默转染处理后,观察到在细胞中,荧光素酶活性,出现一定的升高的现象（P＜0.05）。Sirt-1基因过表达转染,可以削弱SK-N-SH细胞的荧光素酶活性。使用30μM pifithrin-α（p53特异性抑制剂）处理后,荧光素酶活性明显减弱,表明Sirt-1是p53转录活性的负调控因子RT-qPCR结果显示,Sirt-1基因沉默可以导致细胞p21 mRNA水平明显升高（P＜0.05）,而p53、Bax、Bcl-2 mRNA水平无明显差异,表明Sirt-1可以选择性抑制SK-N-SH细胞p53-p21通路,p53与p21的结合活性升高,表明Sirt-1能够抑制p53与p21启动子的结合。用EX527（Sirt-1抑制剂）处理细胞,Western blotting检测结果提示,Sirt-1的表达对p53的蛋白表达没有影响,但是可以显著抑制p53在K382位点的去乙酰化作用。Sirt-1能够去启动p53乙酰化进程,削弱p53转录活性,细胞周期进程,继而被调节。同SK-N-SH细胞的实验结果相比,Sirt-1修饰对SK-N-AS细胞增殖没有明显影响（P＞0.05）。综上,Sirt-1主要通过p53的存在影响细胞增殖和细胞周期的分布。Sirt-1基因沉默转染大大降低了 Sirt-1的表达,使细胞穿膜数和迁移数明显减少,从而显著削弱了 SK-N-SH细胞的侵袭和迁移。相反,Sirt-1基因过表达转染,能够引起Sirt-1蛋白,表达水平升高,进而,明显促进SK-N-SH细胞,发生侵袭、迁移。SK-N-SH细胞经过Sirt-1基因过表达/沉默转染后,加入200μM H2O2（过氧化氢）,用来触发氧化应激（OS）反应,结果显示,Sirt-1过表达时,SK-N-SH细胞中,H2O2诱导产生的ROS,出现被清除现象。添加10 mM EX527后,SK-N-SH细胞ROS水平显著升高,表明Sirt-1的去乙酰化活性对于其ROS抑制活性至关重要。Western blotting结果显示,H2O2处理可以明显增加Sirt-1蛋白水平,而对p53蛋白水平无影响,但却能够降低p53的转录活性。加入EX527后,H2O2导致的p53的低转录活性被显著抑制。表明,氧化应激（OS）,可以引起SK-N-SH细胞,Sirt-1过表达,Sirt-1发挥去乙酰化作用,削弱p53的转录活性。加入EX527后,p21、Bax、Bcl-2 mRNA表达明显增加,表明H2O2（过氧化氢）诱导的SK-N-SH细胞发生氧化应激（OS）,能够促使Sirt-1升高,可以影响下游基因p21、Bax、Bcl-2的表达,进而调控细胞的增殖与凋亡。结论Sirt-1是神经细胞增殖的积极调节因子,Sirt-1可以促进细胞周期进程、抑制细胞凋亡。Sirt-1可以通过去乙酰化,影响p53转录活性,可能选择性地抑制p53介导的p21,影响Bax、Bcl-2表达,以调节细胞周期进程,促进SK-N-SH细胞的生长。在神经元细胞中,氧化应激抑制p53的转录活性,诱导Sirt-1,可保护它们免受氧化应激损害。Sirt-1的去乙酰化活性对于其ROS抑制活性至关重要。过度表达的Sirt-1通过其脱乙酰化活性,抑制氧化应激诱导的凋亡细胞死亡。