寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)是一种人类致病性黄病毒，该病毒于1947年从乌干达寨卡森林的恒河猴身上分离出来，并因此得名。寨卡病毒作为一种蚊媒传播病毒，近年来在美洲和亚洲等世界各地不断流行，由于其传染性强，己造成数百万人感染。寨卡病毒感染的主要并发症包括先天性小头畸形，严重的神经系统疾病如格林-巴利综合征和脑膜脑炎，以及可能对生育能力有长期潜在影响的附睾睾丸炎。很难预测寨卡病毒何时再爆发，开展寨卡病毒相关研究对于防范和治疗寨卡病毒相关疾病有重要意义。寨卡病毒疫苗可使人或动物产生针对寨卡病毒的特异性免疫反应从而达到保护机体，使其免受寨卡病毒感染的作用，所以接种疫苗可能是预防寨卡病毒和其他传播性病毒感染和蔓延的最有效措施。已有实验表明寨卡病毒中和性抗体在免疫保护过程中起着重要作用，刺激机体产生有效的中和性抗体是疫苗有效性评价的基本要求，而标准有效的中和试验在评估疫苗的疗效中起着重要作用。
　　目前通用的噬斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test，PRNT)是检测中和性抗体效价的最常用方法，是免疫测定的“黄金标准”，但其试验周期长，从实验准备到染色计数至少需要五天;操作繁琐，试验过程中需要配制对温度有较高要求的琼脂糖固体培养基;通量低，肉眼计数噬斑常用6孔、24孔或48孔细胞板，难以利用单位面积较小的96孔细胞板。传统噬斑法的这些缺点，限制了其在临床和实际中的应用。本研究建立的周期短、操作方便、通量高的“微孔板计数法”和“微孔板细胞ELISA法”用于检测寨卡病毒及寨卡病毒中和性抗体，为寨卡疫苗的免疫学评价和提供方便可靠的方法。本研究首先建立了一种基于免疫吸附原理的“微孔板计数法”检测胞内病毒:在病毒感染细胞后，对检测指标、检测时间、病毒吸附时间、牛血清白蛋白(BSA)浓度、稀释缓冲液、一抗、二抗及其工作浓度、显色时间和检测通量等进行优化，确定了最佳的检测条件，用此方法检测血清中寨卡病毒中和性抗体水平，利用多次独立重复试验评估该方法重复性和准确性。此外，在“微孔板计数法”的基础上，通过改变信号的检测方法进一步改进实验方法，根据细胞-ELISA的实验方法，选择具有HRP标记的抗体，利用TMB单组份显色液显色及酶标仪检测吸光度建立了“微孔板细胞ELISA法”检测寨卡病毒中和性抗体水平。“微孔板计数法”检测寨卡病毒及寨卡病毒中和性抗体相比传统噬斑法和噬斑减少中和试验具有明显优势:检测周期从五天缩短至两天，节省了大量时间;试验过程中不使用固体细胞培养基，操作简便;96孔细胞板一次可检测多个样品，提高了检测通量;此外，微孔板计数法使用光学显微镜观察计数单个完整的被感染细胞，相比肉眼识别边缘不够清晰甚至有交叉重叠的噬斑，更加准确。与“微孔板计数法”相比，“微孔板细胞ELISA法”不需要人工计数，减少人工依赖，使得检测方法更加方便，避免了实验者主观因素对结果的影响，检测结果更加准确。
　　本文建立的检测寨卡病毒及寨卡病毒中和性抗体的“微孔板计数法”和“微孔板细胞ELISA法”，有助于寨卡疫苗研发及候选疫苗免疫效果的评价。