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目的我国为原发性肝癌的高发区,其死亡率居恶性肿瘤的第二位,在欧美发达国家肝癌发病率亦呈上升趋势,然而迄今为止尚无令人满意的方法控制肝癌的发生和发展。中草药具有多靶点、多效应、毒副作用低、能提高机体免疫力、不易产生耐药性等独特优点,在肿瘤治疗中具有重要地位。应用现代医学方法,探索中草药的抗肿瘤作用,提取其中的有效成分,开发具有中国特色和自主知识产权的抗癌药物,一直是人们研究的热点。近年来发现中药仙鹤草具有较明显的体内外抗癌作用。为此,本研究以仙鹤草的水提取液体外作用于肝癌SMMC-7721 细胞,观察其抗肝癌作用,探讨其作用机理,以期为开发原发性肝癌治疗新药提供实验依据。方法取干燥仙鹤草加水并加热,制备生药含量为1.25g/ml 的仙鹤草水提取液,过滤除菌冷藏备用,使用时用培养基稀释为所需浓度。体外复苏肝癌SMMC-7721 细胞,于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养基中常规培养。取对数生长期的SMMC-7721 细胞消化并制成单细胞悬液,接种于96 孔板,细胞生长良好后更换含不同浓度仙鹤草水提取液培养基继续培养,取3 个时间点(含药培养基作用24、48、72h 后)采用MTT 比色法观察对肝癌细胞生长的影响,计算抑制率(IR)和IC50。实验分为A、B、C、D 组,仙鹤草水提取液浓度分别为40、20、10、5mg/ml,并设空白对照组(培养基不加药液)、5-Fu 对照组(含5-Fu 10μg/ml 培养基)。对作用明显的A、B 组进行仙鹤草水提取液诱导SMMC-7721 细胞凋亡的系列检测:①制备细胞爬片,常规HE 染色,光镜下观察细胞形态学变化;②采用流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率;③制备细胞爬片,采用免疫组织化学染色技术检测Bcl-2、P53蛋白的表达变化。结果①仙鹤草在体外可抑制肝癌SMMC-7721 细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性。40mg/ml 浓度组作用24h 后即观察到对细胞生长的抑制作用,3