研究背景胰腺导管腺癌(PDAC),作为一个严重影响全球健康的疾病,是最常见的癌症相关死亡原因之一。在中国,胰腺癌患者的中位生存时间只有7.8个月。由于对胰腺癌致病本质的研究不清晰,在所有的PDAC患者中,只有30%接受了根治性手术,而只有9.8%的患者接受了全面有效的治疗。胰腺癌存活率低的原因可以归结为其生物学表型的特点,即早期局部浸润和转移。因此,我们迫切需要阐明与这种致死性疾病的发生、发展、治疗抵抗和转移相关的分子机制。了解其发生机制,能够基于机制研发或实施新的药物或者治疗手段,这对于提高胰腺癌的治疗效果与预后具有十分重要的现实意义。而且,许多机制中的关键蛋白恰恰是理想的预后标志物,这对于治疗方案的选择以及化疗方案与手术治疗方案的选择具有重要的临床指导意义。氧甾酮结合蛋白(OSBP)和OSBP相关蛋白(ORPs)是一类具有固醇/脂质运输和调节作用的家族,但目前具体功能还未能研究彻底。然而,存在于细胞膜连接点,酶调控位点以及蛋白复合体上的OSBP家族的蛋白对于型号的传导,囊泡的运输以及脂质的代谢都起到了重要的作用。越来越多的蛋白被发现与OSBP家族有着相互作用,从侧面反映了此家族与细胞调控的方方面面相关。OSBP2虽然在结合的脂类与固醇上与家族其他成员相似,但osbp2在肿瘤的增殖与存活中都发挥的重要作用,包括肾脏肿瘤、卵巢肿瘤,但对于胰腺癌中的相关报道仍比较少,以及其在肿瘤的侵袭转移中的作用,相关研究尚比较缺乏。对于OSBP2在胰腺癌增殖侵袭转移的作用及其分子机制可以完善相关肿瘤增殖的分子通路,甚至可以作为一个新的药物靶点。OSBP2蛋白作用为一个新发现的位点,其对于胰腺癌生物学行为作用的研究仍不明确,胰腺癌细胞的恶性生物学行为,包括高侵袭性与高转移性,是目前研究的热点也是难点。因此,将OSBP2蛋白作为一个新的研究指标,探究其对于胰腺癌细胞的作用,可能成为胰腺癌生物学行为研究的一个新的突破口,对于胰腺癌的治疗,改善其预后具有重要的临床意义。研究目的1.检测三株胰腺癌细胞中OSBP2蛋白的表达量同时通过实验验证上调与下调蛋白对胰腺癌细胞增殖侵袭转移等的影响。2.初步探究OSBP2蛋白影响胰腺癌细胞增殖侵袭转移的可能通路。方法1.Western blot技术检测三株胰腺癌细胞株中osbp2的基础表达情况。利用胰腺癌细胞株ASPC1和BXPC3细胞,通过脂质体载体将osbp2的siRNA以及过表达osbp2基因的质粒分别导入上述细胞中,建立下调和上调表达osbp2的胰腺癌细胞株。2.通过CCK8法检验osbp2对胰腺癌细胞增殖的影响;通过Transwell和划痕实验探究osbp2对胰腺癌细胞侵袭行为的影响3.通过western blot探究上调或下调osbp2蛋白对胰腺癌细胞中EMT相关蛋白表达的影响结果1.在实验室已有的三株胰腺癌细胞株中,ASPC1胰腺癌细胞株表达OSPB2蛋白的量是最高的,而BXPC3细胞的表达量是最低的。以ASPC1及BXPC3为工具细胞株分别成功构建下调以及上调表达蛋白的胰腺癌细胞株。2.下调OSPB2的表达明显抑制了了胰腺癌ASPC1细胞株的增殖,且下调表达的胰腺癌ASPC1细胞的迁移运动、侵袭转移的能力明显降低。而在过表达OSBP2蛋白的BXPC3细胞株中,胰腺癌BXPC3细胞的增殖能力明显得到了增强,且在上调表达OSBP2蛋白的胰腺癌BXPC3细胞中,细胞的的迁移运动、侵袭转移的能力也得到了明显的增强。3.Western blot显示OSBP2通过改变一系列上皮间质转换(EMT)中关键调控蛋白的表达影响肿瘤细胞的迁移运动、侵袭转移的能力。EMT过程可能是OSBP2的调控位点,从而影响胰腺癌细胞的迁移运动、侵袭转移的能力。结论:在胰腺癌细胞系中,OSBP2蛋白的表达存在明显的不同,下调OSPB2的表达明显降低了胰腺癌细胞的增殖、迁移运动、侵袭转移的能力。相对的,上调OSBP2的表达可明显增强胰腺癌的增殖、迁移运动、侵袭转移的能力。EMT过程可能是OSBP2的调控位点,从而影响胰腺癌细胞的迁移运动、侵袭转移的能力。