研究目的:激活诱导的胞苷脱氨酶（AID）是B细胞体液免疫的关键参与者。然而AID的异位表达和脱靶突变,可导致染色体畸变和基因组不稳定,从而引发多种恶性肿瘤。在伯基特淋巴瘤（Burkitt淋巴瘤）中,AID引起的突变导致c-Myc癌基因过度表达,进而驱动肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移。AID可能成为Burkitt淋巴瘤靶向治疗的重要靶点。然而国内外目前尚无AID抑制剂的研究报道。中药单体因其低毒性高活性的特点,是蛋白抑制剂筛选的主要来源。因此本论文拟从中药单体中筛选AID蛋白抑制剂,并初步探究其对Burkitt淋巴瘤细胞的抑制作用及分子机制。方法:1.通过计算机辅助药物设计的虚拟筛选方法,从中药单体库中,筛选AID蛋白抑制剂的候选化合物。2.通过sf9昆虫表达系统,表达AID真核蛋白。首先构建含AID基因的重组质粒,制备重组杆粒Bacmid,生产重组杆状病毒,并将病毒转染至sf9细胞进行AID重组蛋白的表达。然后通过Western Blot检测,验证AID蛋白是否成功表达。最后经MBP纯化树脂、Hi Trap Heparin HP肝素柱、分子筛纯化AID蛋白。3.通过胞苷脱氨反应观察虚拟筛选得到的中药单体对AID酶的抑制作用。首先构建AID酶底物—G-四链体,通过天然PAGE和ABTS显色反应验证G-四链体的形成,以及建立AID酶和G-四链体的胞苷脱氨反应,并观察虚拟筛选得到的中药单体对AID酶活性反应的影响,从而验证其对AID酶的抑制作用。4.检测筛选得到的AID蛋白抑制剂,对AID高表达的Burkitt淋巴瘤细胞的抑制作用。通过CCK8法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,以及Western Blot实验检测c-Myc、p53等AID下游蛋白的表达。结果:1.通过虚拟筛选得出的8个中药单体化合物与AID蛋白催化活性中心有亲和力,同时能够与Glu1058关键催化残基形成氢键作用,对AID蛋白有潜在抑制作用。这8个中药单体分别为希格纳敏,精盐B,阿糖腺苷,核黄素,（+）-儿茶素水合物,胞苷,L-尿苷,迷迭香酸甲酯。2.经过sf9昆虫表达系统成功表达了AID蛋白,并通过纯化柱得到大量且高纯度的AID蛋白样品。3.成功构建了AID蛋白的底物G-四链体,并建立AID酶活性反应-胞苷脱氨反应。通过酶活性实验验证,从8个候选中药单体中筛选获得AID蛋白抑制剂—迷迭香酸甲酯。4.细胞实验结果显示迷迭香酸甲酯可抑制Daudi细胞的增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞G0/G1周期阻滞,并下调c-Myc、CDK1、CDK2、CDK4蛋白表达,上调p53蛋白表达。结论:本研究首次运用计算机虚拟筛选技术、生物化学实验、药理学实验,筛选出A ID蛋白的抑制剂—迷迭香酸甲酯。迷迭香酸甲酯可抑制Daudi淋巴瘤细胞的增殖、诱导凋亡以及阻滞细胞周期,其抗淋巴瘤作用可能是通过抑制AID酶的活性,从而影响c-Myc等下游蛋白的表达。该化合物有望设计成为AID抑制剂的先导化合物,在Burkitt淋巴瘤等AID异常活性诱发的肿瘤治疗中,具有潜在的临床应用价值。