【摘 要】
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本文以从海南甘蔗渣中筛选的毛霉HN0512（Amylomyces.rouxii）为实验材料,经初步鉴定其具备产纤维素酶的能力,在此基础上优化培养基,得到活性较高的粗酶（4.07IU/mg）。采用硫酸铵分级沉淀、HiprepTM desalting（26×10）、弱阴离子交换层析柱、HiTrap Q FF强阴离子交换柱层析分离纯化技术分离纯化出单一组分纤维素酶,经SDS-PAGE电泳分析表明该酶的相
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本文以从海南甘蔗渣中筛选的毛霉HN0512（Amylomyces.rouxii）为实验材料,经初步鉴定其具备产纤维素酶的能力,在此基础上优化培养基,得到活性较高的粗酶（4.07IU/mg）。采用硫酸铵分级沉淀、HiprepTM desalting（26×10）、弱阴离子交换层析柱、HiTrap Q FF强阴离子交换柱层析分离纯化技术分离纯化出单一组分纤维素酶,经SDS-PAGE电泳分析表明该酶的相对分子量约为18.7KD,分离纯化出的纤维素酶的比活力（140 IU/mg）提高了66.0倍,回收率为26.7%。TLC分析结果表明,该酶为内切葡聚糖酶（CMCase）。对酶学性质做了分析:该酶的最适反应温度60℃,最适pH为5.0;在pH4.0-6.5范围内都有很好的稳定性,在70℃还能保持50%以上的酶活力。Lineweaver-Burk双倒数作图法求得Km=12mg/ml,Vm=0.5878μM/min;金属离子Co2+,Mg2+,Cu2+,Na+对酶起抑制作用,Fe3+,Zn2+,K+,Ba2+,Fe2+对酶起激活作用,而表面活性剂尿素也对酶起到了激活作用。对该酶的基因克隆进行了初步的研究,毛霉菌丝体中含有大量的多糖类物质,所以在用TRIZOL法提取RNA的时候容易生成核酸多糖复合物,导致抽提RNA质量不好,不能用于后续试验,本文对这方面进行了探索,对实验方法进行了改进,得到了比较理想的RNA。然后通过对数据库中内切酶氨基酸序列的分析,设计简并引物,试图扩增出保守区片段,为以后该酶全长cDNA的克隆提供了依据。本文发现了一个能够产纤维素酶的新菌株,从其发酵上清中纯化到了热稳定性和pH稳定性较好内切葡聚糖酶（CMCase）,该酶在饲料、发酵、食品等方面有着广泛的用途。
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