脑出血凝血酶介导的神经毒性作用及其机制的实验研究

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第一部分大鼠脑出血后血肿周围PAR-1mRNA和蛋白表达的实验研究目的:探讨脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)后血肿周围蛋白酶激活受体-1(Protease activated receptor-1,PAR-1)表达的情况及其与凝血酶(Thrombin,TM)的关系.方法:胶原酶Ⅶ型、TM、胶原酶Ⅶ型+水蛭素脑内立体定向注射制作动物模型.在相应的时间点处死动物,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测PAR-1mRNA表达,应用免疫组织化学技术检测PAR-1蛋白表达.第二部分脑内注射凝血酶对血脑屏障通透性的影响及其机制的实验研究目的:探讨凝血酶(TM)脑内注射对血脑屏障(BBB)通透性的影响及其可能机制.方法:在体内,将TM或TM+组织蛋白酶G(CATG)立体定向注入SD大鼠右侧基底节区,伊文氏兰(EB)测定血脑屏障通透性,干湿重法测定脑水含量;在体外,将脑微血管内皮细胞进行培养,培养液中加入TM或TM+CATG,倒置显微镜下动态观察内皮细胞形态的变化,免疫组织化学技术检测基质金属蛋白酶(MMP-2)表达的改变.第三部分脑内注射凝血酶对NF-κB活性及ICAM-1mRNA表达的影响目的:探讨凝血酶(TM)脑内注射对核因子(NF-κB)活性、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达及白细胞浸润的影响及其可能机制.第四部分脑内注射凝血酶对细胞凋亡的影响及其机制的实验研究目的:探讨凝血酶(TM)脑内注射对周围组织Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡的影响.
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