目的:位于小鼠肾脏远端小管的钠氯共转运体(Sodium Chloride Co-transporter,NCC)不仅对血钠水平起到调控作用,近年研究发现NCC还起到了“钾感受器”的作用。目前认为远端小管主要的排钾通道为肾脏外髓钾通道(Renal Outer Medullary Potasium Channel,ROMK),该通道受到醛固酮的调控,但在急性排钾的时候,醛固酮升高前尿钾排泄就已显著增加(醛固酮在高钾摄入6小时后下游调控的通道才检测到显著升高)。除了ROMK外,远端小管还存在一类钾排泄通道,即大电导钙激活钾通道(Large Conductance Ca2+-Activated K+Channel,BK),该通道一直以来被认为是ROMK的配角,协助ROMK发挥排钾作用。考虑BK通道并不受醛固酮的调控,并且是远端小管除ROMK外仅存的排钾通道。因此,本研究将探讨小鼠肾远端小管离子通道的迅速排钾作用机制。方法:将8-10周的C57BL/6小鼠用异氟烷麻醉后,采用预冷缓冲液进行灌流,待肝脏及肾脏变白后,停止灌流,并迅速取出双侧肾脏,去除包膜,在零度的含饱和氧气液体中由振动切片机切成300微米的肾片。浸泡在95%O2+5%CO2类似Ringer液中30分钟有助于缓解肾片机械损伤和回复活性,再随机孵育在正常钾和高钾的孵育液体中处理不同时间后,通过Western Blot的方法观察5分钟、15分钟及30分钟后NCC的活性及丰度变化,并检测使用氯化钯和氯化铷干预后,NCC活性及丰度的而变化,以及2小时后的BK通道不同亚基的总蛋白和膜蛋白的活性及丰度变化。应用Image J进行灰度值分析、并采用Graphpad Prism软件进行统计学分析,p<0.05存在统计学差异。结果:1)肾片在高钾溶液中孵育5分钟后,NCC磷酸化水平,即活性显著降低(p<0.01)、总NCC丰度无明显差异,延长孵育时间至15分钟和30分钟,发现NCC磷酸化水平进一步下降(p<0.001);2)在孵育液中加入氯化钡或氯化铷,可以发现NCC磷酸化水平受到显著抑制(p<0.001&p<0.01),总NCC丰度无明显差异;3)肾片在高钾溶液中处理2小时后,检测BK通道核心亚基α亚基和调节亚基β4的表达情况,发现总蛋白表达较正常组没有明显变化;考虑到BK需要上膜才能发挥排钾作用,本研究又进一步提取组织膜蛋白,发现不同含钾浓度孵育液处理后BKα亚基也未检测到显著差异。结论:1)高钾溶液可迅速使NCC失活,即磷酸化水平下调,并且随着孵育时间延长,此种变化越发显著;2)氯化钡或氯化铷,影响NCC磷酸化水平,推测钾离子通道的活性会影响NCC活性;3)高钾组BKα亚基的总蛋白和膜蛋白、以及BKβ4亚基总蛋白没有明显变化,考虑可能需要离体肾小管电生理以明确BK通道在高钾条件下的急性分布情况及开放频率。