为了解近期山东地区禽源H9N2亚型禽流感发病流行状况及流行毒株分子遗传进化特征,对2012-2013年山东各地送检的种鸡、商品蛋鸡以及商品肉鸡6385份血清进行了检测分析,对35例疑似病例进行了临床综合诊断分析,对部分H9N2亚型AIV分离株通过RT-PCR扩增病毒的HA基因片段,进行测序及遗传进化分析,并对这些病毒的受体结合性进行了检测分析。结果表明:山东地区免疫鸡群H9亚型的HI抗体水平较高,尤其是种鸡和商品蛋鸡大多数平均高于8个滴度。相比而言,商品肉鸡和商品蛋鸡群免疫合格率较低,疑似感染鸡群的比例较高,鸡群免疫状态不容乐观,感染风险较大;种鸡群免疫合格率较高,疑似感染鸡群的比例较低,鸡群免疫状态较好,感染发病的风险较低。两年度相比各类鸡群抗体水平具有一定的差异性,2013年各类鸡群的免疫状态明显好于2012年;对送检的35例疑似病例经过综合诊断,19例确诊为H9N2亚型禽流感,确诊病鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化均符合H9N2亚型禽流感的疾病特征;分离鉴定病毒17株,对其中6株病毒进行了分子生物学特性检测。6株H9N2亚型AIV分离株的HA基因在HA1和HA2的氨基酸裂解位点均为PSRSSR/GLF基序,符合低致病性病毒株氨基酸序列特征,多数病毒HA潜在糖基化位点为8个,所有分离株病毒的受体结合位点226位均为L,经红细胞受体结合性试验验证表明这些病毒均同时具有α-2,3和α-2,6受体结合特性,表明目前北方地区流行的H9N2亚型AIV具有感染哺乳动物的潜在威胁。本研究结果对加强H9N2病毒的分子流行病学监测具有重要意义。