大肠杆菌O157:H7比色和热敏双信号免疫传感检测技术研究

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食源性病原体感染引起的传染病严重威胁全球公共卫生安全,大肠杆菌O157:H7具有病原性,是较为常见的引发肠出血性大肠杆菌(EHEC)。免疫传感检测方法操作简单、快捷,具有高灵敏度和高特异性。亚化学计量氧化钼纳米材料由于足够浓度的氧空位所诱导的大量自由电子,可以表现出强的局域表面等离子体共振效应。其包含不同的相和组成,具有低价格、低毒性和温和的合成方法、良好的生物相容性和生物可降解性。同时,亚化学计量氧化钼纳米材料的氧空位缺陷也增加了其纳米粒子表面改性的可能性。论文基于氧化钼的氧空位缺陷,利用对巯基苯甲酸(4-MBA)同时作为还原剂和功能化表面修饰剂对三氧化钼纳米粒子(Mo O3NPs)进行了还原和修饰,制备得到亚化学计量氧化钼(4-MBA-Mo O3-xNPs),并对其近红外光热转换性能,结构和形貌进行了表征。结果显示制备的4-MBA-Mo O3-xNPs在808 nm波长激光照射下具有优异的光热转换性能,光热转换效率达到了42.9%。利用所制备的4-MBA-Mo O3-xNPs作为信号元件,建立了大肠杆菌O157:H7热敏免疫传感检测技术。首先,将4-MBA-Mo O3-xNPs与大肠杆菌O157:H7的特异性抗体偶联制备光热传感探针,结合磁球免疫磁分离技术建立检测食源性致病菌大肠杆菌O157:H7的热敏免疫传感器。由于目标菌特异性结合纳米颗粒的含量不同,“磁球-目标菌-4-MBA-Mo O3-xNPs”的混合物溶液可以呈现不同的颜色变化,从而实现了对目标菌的可视化检测。利用红外热成像摄像机记录与纳米材料结合的目标菌在808 nm激光照射下的温度响应,可以定量分析目标菌的含量。实验结果表明,建立的检测方法检测限为14 CFU/m L(R~2=0.9920),线性范围为:1.4×10~1-1.4×10~6CFU/m L。将该方法应用于牛奶和苹果汁中O157:H7大肠杆菌的测定,回收率在82.45%~105.08%之间,结果令人满意。同时对结合了4-MBA-Mo O3-xNPs的大肠杆菌O157:H7给予808 nm波长激光照射,结果表明,当4-MBA-Mo O3-xNPs添加量为120μg/m L,给予808 nm波长激光照射(1 W/cm~2)5 min,几乎100%的目标菌能够被杀灭。
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