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目的:通过TSP-PCR扩增联合基因测序技术,检测本地区皮肤疣患者(包括寻常疣、跖疣和扁平疣)感染HPV的型别,探讨皮肤疣自体植入疗效与HPV不同型别的关系,以期为解释临床疗效提供理论依据。
方法:收集我科门诊就诊的皮肤疣(寻常疣、跖疣和扁平疣)患者149例,取其疣体组织进行自体植入治疗,并随访6个月~3年。同时,对所取疣体组织进行DNA提取,基于所设计的6对皮肤疣常见HPV1、2、3、4、7和10型的TSP,采用TSP-PCR扩增联合基因测序技术,检测分析皮肤疣HPV的基因序列和型别,结合临床探讨皮肤疣自体植入疗效与HPV型别的关系。
结果:本研究完成随访患者102例,其中寻常疣31例,跖疣29例,扁平疣42例。疣体组织DNA提取样本通过TSP-PCR扩增,HPV感染检出率高达99.02%(101/102);所设计的6种HPV型别均有检出,其中HPV2检出率最高,为78.43%,其余HPV1为48.04%、HPV10为25.49%、HPV3为21.57%、HPV4为9.80%、HPV7为1.96%。此外,检测结果显示本地区寻常疣、跖疣患者感染HPV型别主要为HPV2、1和4型,扁平疣主要为HPV2、10、3和1型;单一HPV型别检出率为41.58%,其中HPV1型9例、2型23例、3型3例、4型3例、10型4例,其余为多种HPV型别感染,检出率为58.42%,且组合方式多样化,以HPV1+2、2+10、2+3、1+2+10、2+3+10、1+2+3型为主。新发现寻常疣感染HPV3和10型,扁平疣感染HPV7型。通过TSP-PCR扩增联合基因测序,共检测疣体组织DNA提取样本38例,检出11种HPV型别,即HPV1、2、3、4、7、10、27、29、65、77和94型。检测结果进一步显示,寻常疣、跖疣还感染HPV27和65型,扁平疣则还存在HPV29、77和94型的多种型别感染。皮肤疣自体植入疗效表明,寻常疣、跖疣和扁平疣有效率分别为70.97%、75.86%和71.43%,三组疗效无统计学显著性差异。HPV单一型别和多种型别感染的治疗有效率分别为78.57%和67.80%,两者差别无统计学意义。年龄<18岁组的治疗有效率为92.59%,>35岁组的为52.38%,前者明显高于后者且差异有统计学意义;病程>3年组的治疗有效率为54.29%,明显低于病程<1年组的92.11%,两者差异有统计学意义。这些结果提示,皮肤疣自体植入疗效与患者年龄和病程关系更大,而与皮肤疣HPV型别之间的关系并不明显。
结论:本文通过TSP-PCR扩增联合基因测序共检测出11种皮肤疣HPV型别,即HPV1、2、3、4、7、10、27、29、65、77和94型。寻常疣、跖疣感染主要为HPV2、1、4和27型,扁平疣感染主要为HPV2、10、3和1型,推测HPV2和27型所在的α“属”4“种”可能为本地区皮肤疣感染的优势基因种族,这可为今后有针对性地研制和应用抗皮肤疣HPV疫苗提供有意义的参考。新发现寻常疣感染HPV3和10型,扁平疣感染HPV7型。多种型别HPV感染率较高,且组合方式多样化。皮肤疣自体植入治疗不仅对单一HPV型别感染的皮肤疣有效,对多种HPV型别的也有效。感染单一型别与感染多种型别HPV的皮肤疣疗效上无显著区别,原因可能与实验样本容量不够大而掩盖了差异性有关,或许也暗示着治疗过程中各种皮肤疣HPV型别可能存在非常类似或者相同的自身免疫应答机制。皮肤疣自体植入疗法对年龄小于18岁的青少年和病程小于3年的患者疗效较好,对年龄大于35岁和病程大于3年的则疗效较差,这对于临床早期治疗具有现实指导价值。