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目的:本研究利用细胞学实验,选择Caco2细胞,稳定转染NHERF4后,运用PI3K/AKT信号激动剂及抑制剂上调和下调PI3K/AKT信号通路,了解NHERF4表达和细胞内定位,观察分析NHERF4对PI3K/AKT-SLC26A3作用的影响,从而分析UC中NHERF4对SLC26A3表达的影响奠定细胞学实验基础。方法:1.利用慢病毒LV-NHERF4感染Caco-2细胞,经嘌呤霉素筛后,获得实验所需的稳定转染NHERF4的Caco-2细胞株。2.利用未转染NHERF4的Caco-2细胞和转染NHERF4质粒的Caco-2细胞,分别给予不同浓度的IGF-1试剂,加药浓度依次为0.1ug/m L、0.2ug/m L、0.4ug/m L、1ug/m L、2ug/m L、3ug/m L,观察NHERF4和SLC26A3蛋白表达量,分析NHERF4对PI3K/AKT-SLC26A3作用的影响。3.利用未转染NHERF4的Caco-2细胞和转染NHERF4质粒的Caco-2细胞,分别给予不同浓度的LY294002试剂,加药浓度依次为1u M、2u M、3u M、4u M、5u M、6u M。观察NHERF4和SLC26A3蛋白表达量,分析NHERF4对PI3K/AKT-SLC26A3作用的影响。结果:1.成功构建稳定转染NHERF4的Caco-2细胞株,空白组与转染组差异具有统计学意义。2.在未转染NHERF4的Caco-2细胞中,当激活PI3K/AKT信号通路时(N:0.336±0.007,0.1:0.478±0.001,0.2:0.488±0.002,0.4:0.678±0.002,1:0.613±0.001,2:0.546±0.001,3:0.455±0.004,P<0.05),未转染组中NHERF4并未表达,SLC26A3蛋白表达量随着IGF-1浓度的增加而增加,增加至0.4ug/m L时达高峰,当IGF-1浓度大于0.4ug/m L后,SLC26A3蛋白表达量呈降低趋势(N:0.427±0.011,0.1:0.613±0.003,0.2:0.676±0.001,0.4:0.976±0.001,1:0.827±0.001,2:0.729±0.002,3:0.497±0.001,P<0.05),转染NHERF4质粒的Caco-2细胞中SLC26A3蛋白表达量随着IGF-1浓度的增加而增加,增加至0.4ug/m L时达高峰,当IGF-1浓度大于0.4ug/m L后,SLC26A3蛋白表达量呈降低趋势(N:0.484±0.002,Z:0.678±0.009,0.1:0.794±0.003,0.2:0.798±0.003,0.4:0.937±0.006,1:0.770±0.002,2:0.786±0.002,3:0.511±0.007,P<0.05)。3.在未转染NHERF4的Caco-2细胞中,当抑制PI3K/AKT信号通路时(N:0.758±0.001,1:0.988±0.007,2:0.808±0.004,3:0.684±0.002,4:0.497±0.005,5:0.490±0.009,6:0.465±0.003,P<0.05),NHERF4未表达,SLC26A3表达量随着LY294002浓度的增加而减少(N:0.605±0.001,1:0.787±0.005,2:0.958±0.002,3:0.698±0.001,4:0.756±0.002,5:0.629±0.007,6:0.598±0.003,P<0.05),转染NHERF4质粒的Caco-2细胞中NHERF4蛋白表达量未随着LY294002浓度的浓度改变而改变,SLC26A3蛋白表达量随着LY294002浓度的升高呈降低趋势(N:0.678±0.007,Z:0.565±0.002,1:0.673±0.007,2:0.690±0.007,3:0.612±0.014,4:0.563±0.003,5:0.509±0.001,6:0.510±0.005,P<0.05)。结论:1.PI3K/AKT信号通路可能对Caco-2细胞中NHERF4的表达不产生影响。2.本研究可提示在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中持续过度激活的PI3K/AKT信号可能是患者肠黏膜中SLC26A3蛋白表达减少的机制之一。