【摘 要】
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目的:研究淫羊藿苷在骨坏死微环境中对狗骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:12月龄清洁级健康杂种犬,雌雄不限,体重15-20Kg。利用液氮冷冻法制作狗股骨头坏死模
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目的:研究淫羊藿苷在骨坏死微环境中对狗骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:12月龄清洁级健康杂种犬,雌雄不限,体重15-20Kg。利用液氮冷冻法制作狗股骨头坏死模型,造模后2周于髂嵴上穿刺抽取骨髓10mL,利用犬单个核细胞分离液分离单核细胞层细胞,常规传代培养犬BMSCs。同时处死实验犬,取出坏死的股骨头,无菌条件下切成小块,放入10%FBS的DMEM培养基中培养,每隔3天换液1次,并收集坏死骨培养液。取第2代细胞进行实验,更换含有5%坏死骨培养液的条件培养基,培养基中淫羊藿苷终浓度分别为2.58、4.18、6.77、10.95、17.72μg/ml。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养第7天测细胞外碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,第8天进行细胞ALP染色,第14天进行茜素红染色及钙化结节计数。结果:原代培养细胞呈典型成纤维细胞样形态;坏死骨培养液可促进BMSCs增殖,但对其分化无明显影响,淫羊藿苷可抑制BMSCs增殖,但能提高BMSCs的ALP活性及ALP染色阳性率,增加钙化结节的数量。结论:以坏死骨培养液来模拟骨坏死微环境的方法可行,淫羊藿苷在骨坏死微环境中同样可促进BMSCs的成骨性分化,说明淫羊藿苷可能可作为一种增强BMSCs治疗股骨头坏死疗效的辅助药物。
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