【中图分类号】R512【文献标识码】B【文章编号】1632-5281（2014）09
　　乙型肝炎是我国的高发性传染病，其表面抗原携带率在正常人群中占15%，临床上大多采用ELISA检测乙肝，我科检测乙肝两对半试剂盒为上海科华生物技术有限公司产品。ELISA测定通常为手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，操作非常简单，一般涉及到标本收集保存、实际准备、加样、温育、洗板、显色、结果判断及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，现分述如下。
　　一 标本的收集和保存
　　用于ELISA测定乙肝的标本最为常用的是血清，血清应当分离好，注意避免严重溶血。科华ELISA试剂盒以HRP为标记酶，血红蛋白中含有血红素基因，其有类似过氧化物的活性，容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。样本的采集分离中尽量避免细菌污染，血清标本若以无菌操作分离则可以在2-8℃保存一周，如有菌操作则建议冰冻保存。
　　二 试剂准备
　　试剂在2-8℃冰箱中保存，在实验开始前将试剂从冰箱拿出来置37℃平衡30分钟后方可应用，目的是在后面的温育中，能使反应微孔的温度能较快达到所要求的高度。稀释所用的蒸馏水保证质量，洗液最好当天配置。
　　三 加血清标本及反应试剂
　　ELISA测定两对半试剂盒中，血清加样量为50ul，.加样不可过快，避免加在孔上部，不可溅出和产生气泡。试剂加入使用前充分摇匀并弃去1-2滴后垂直滴入，滴速不可过快。酶结合物加入后轻轻水平振动反应板，确保血清和酶结合物充分混匀。
　　四 温育、洗板
　　为确保好的测定效果，尽量采用水浴，温育中让微孔浮于水面上或将湿透的滤纸平铺在一大饭盒中，放置37℃温箱孵育30分钟。洗板要求洗液以蒸馏水25倍稀释，手工洗板将反应液甩出，在板孔中加满洗液静止5秒，甩干在滤纸上拍干，重复5-6次，洗板机洗板最后一次洗完后在滤纸上拍干，具体洗板次数根据洗板机的类型各实验室自己确定。
　　五 显色及结果判断
　　每孔加入显色液A液、B液一滴，充分混匀置37℃孵育15分钟。肉眼判断结果时显蓝色比显黄色易判断，可不用加终止液，以阴阳及空白对照为界。用酶标仪读数结果判断应在反应终止后10分钟完成.
　　六 可能出现的问题及原因 [1]
　　综上所述，尽管ELISA测定的步骤简单，但每一步操作都非常重要，尤以加样、温育和洗板为甚。操作不当直接影响结果，阳性做成阴性，阴性做成阳性，给患者造成精神及经济负担。对一些不常见的结果及时复查后再发报告。
　　参考文献
　　[1]李金明《如何正确的进行ELISA测定操作》。