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摘 要 目的：用PLC法建立鸡胆汁分散片中牛磺鹅去氧胆酸钠的定量分析方法。方法：本文参考《中国药典2005年版二部》，采用高效液相色潜法［1］测定鸡胆汁分散片中的主要成分牛磺鹅去氧胆酸钠含量。采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈-水-1%三氟乙酸为流动相，检测波长为205nm，按外标法定量。结果：牛磺鹅去氧胆酸钠在1.162～46.48μg范围内呈现良好线性关系，相关系数r=0.99999：平均加样回收率为100.6%，RSD分别为0.45%(n=9)。结论：本方法操作简便、准确、可靠，适宜该制剂的质量控制。
关键词 PLC法 鸡胆分散片 牛磺鹅去氧胆酸钠
资料与方法
仪器与试剂：安捷仑1100高效液相色谱仪；G13l5B DAD紫外检测器；G1313A输液泵；G1270A色谱工作站；供含量测定的牛磺鹅去氧胆酸钠对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：110846-200301)；供试品：鸡胆汁分散片由吉林省七星山药业提供［规格：每片含牛磺鹅去氧胆酸钠(C2644NNaO6S)15mg以上，批号：20040701，20040702，20040703］；乙腈为色谱纯，三氟乙酸为分析纯。
色谱条件：色谱柱，Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相，乙腈-水-1%三氟乙酸溶液(35∶55∶10)；p2.9；流速，1.0ml/分；柱温30℃；检测波长205nm［2］；理论板数按牛磺鹅去氧胆酸钠峰计算，应不低1500。
溶液的制备：①对照品溶液：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥24小时的牛磺鹅去氧胆酸钠对照品12.5mg，以流动相为溶剂溶解，定容25ml即得。②供试品溶液：取供试品1片，以乳钵研细，以流动相为溶剂溶解，定容25m1，摇匀，滤过，作为供试品测试溶液。③空白对照溶液：取按处方比例制成的除去鸡胆浸膏的空白片，按对照品溶液配制方法制作空白对照溶液。
测定方法：①空白干扰实验：吸取上述对照品溶液、供试品溶液及空白对照溶液各20μl，进样，记录各自的保留时间。在牛磺鹅去氧胆酸钠CDCA峰位置上，空白对照无干扰。②最低检出限：精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品0.01081g，以流动相定容25ml；取1ml再次以流动相定容25ml，进样1μl，记录色谱图。③最低定量限：取上述对照品溶液，进样2μl，记录色谱图。
线性关系实验：精密量取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液1、2、5、10、20、30、40μl注入色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐-标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=1.77965×102X+23.40，r=0.99999。
精密度实验：取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液(每1ml中含牛磺鹅去氧胆酸钠0.5mg)，按上述色谱条件连续进样8次，每次进样10μl。
稳定性实验：取上述供试品溶液，按上述色谱条件，在0，2，4，6，8，12，24小时，分别测定1次，进样10μl，考察CDCA峰面积。
重复性实验：取鸡胆汁分散片20片(批号：20040702)，精密称取总重量；研细；精密称取1片药剂含量，共5份。
供试品含量测定：分别取鸡胆汁分散片(批号：20040701、20040702、20040703)10片，精密称取总重量；研细；精密称取1片量，按标准品制备方法同法制备供试品溶液，并按上述色谱条件，吸取供试品溶液10μl进样测定，按峰面积外标法计算牛磺鹅去氧胆酸钠含量。
回收率实验：取已知含量的样品(批号：20040702)20片，精密称取总重量；研细；精密称取分别为0.5片量的70%、100%和130%的样品，各精确加入等量的对照品0.245mg；按标准品溶液制备方法同法制备供试品溶液，测定三组平行样。
结果
空白干扰试验：供试品溶液及空白对照溶液各20μl，注入色谱仪，同法测定，结果在CDCA峰相应位置上，空白对照无干扰。
牛磺鹅去氧胆酸钠最低检出限为0.08648μg；牛磺鹅去氧胆酸钠最低定量限为0.17296μg。
线性关系：以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标。回归方程为：Y=1.77965×102X+23.40，r=0.99999。实验结果表明，牛磺鹅去氧胆酸钠进样量在1.162～46.48μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，近似为一通过原点的直线。因此，采用外标一点法测定。
精密度：牛磺鹅去氧胆酸钠峰面积的RSD为0.71%(n=8)。
稳定性：在0、2、4、6、8、12、24小时，CDCA峰而积的RSD为0.3%(n=7)。结果表明，供试品溶液在24小时内稳定。
重复性：5次平行样品的含量的RSD)均为1.2%。
供试品含量测定结果：批号为2004070l、20040702、20040703鸡胆汁分散片。牛磺鹅去氧胆酸钠(C26H44NNaO6S)的含量分别为34.13mg、33.81mg和33.63mg；RSD分别为0.56%、0.835%和0.79%(n=3)。
回收率：平均回收率为100.6%，RSD为0.45%(n=9)。
结论
我们采用PLC法测定鸡胆汁分散片中主要成分牛磺鹅去氧胆酸钠含量，以主要成分牛磺鹅去氧胆酸钠的含量作为控制鸡胆汁分散片的质量标准。本法作为控制鸡胆汁分散片的质量标准方法简便、可靠，样品检测结果准确，精密度及重复性高，回收率为100.6%。可作为质量标准，用于控制药品生产。
参考文献
1 中国药典2005年版.二部.附录XIXA：28-30.
2 张启明,殷晓建,严克东，等.高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量.药物分析杂志，1993，13(5)：321-323.
关键词 PLC法 鸡胆分散片 牛磺鹅去氧胆酸钠
资料与方法
仪器与试剂：安捷仑1100高效液相色谱仪；G13l5B DAD紫外检测器；G1313A输液泵；G1270A色谱工作站；供含量测定的牛磺鹅去氧胆酸钠对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：110846-200301)；供试品：鸡胆汁分散片由吉林省七星山药业提供［规格：每片含牛磺鹅去氧胆酸钠(C2644NNaO6S)15mg以上，批号：20040701，20040702，20040703］；乙腈为色谱纯，三氟乙酸为分析纯。
色谱条件：色谱柱，Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相，乙腈-水-1%三氟乙酸溶液(35∶55∶10)；p2.9；流速，1.0ml/分；柱温30℃；检测波长205nm［2］；理论板数按牛磺鹅去氧胆酸钠峰计算，应不低1500。
溶液的制备：①对照品溶液：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥24小时的牛磺鹅去氧胆酸钠对照品12.5mg，以流动相为溶剂溶解，定容25ml即得。②供试品溶液：取供试品1片，以乳钵研细，以流动相为溶剂溶解，定容25m1，摇匀，滤过，作为供试品测试溶液。③空白对照溶液：取按处方比例制成的除去鸡胆浸膏的空白片，按对照品溶液配制方法制作空白对照溶液。
测定方法：①空白干扰实验：吸取上述对照品溶液、供试品溶液及空白对照溶液各20μl，进样，记录各自的保留时间。在牛磺鹅去氧胆酸钠CDCA峰位置上，空白对照无干扰。②最低检出限：精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品0.01081g，以流动相定容25ml；取1ml再次以流动相定容25ml，进样1μl，记录色谱图。③最低定量限：取上述对照品溶液，进样2μl，记录色谱图。
线性关系实验：精密量取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液1、2、5、10、20、30、40μl注入色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐-标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=1.77965×102X+23.40，r=0.99999。
精密度实验：取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液(每1ml中含牛磺鹅去氧胆酸钠0.5mg)，按上述色谱条件连续进样8次，每次进样10μl。
稳定性实验：取上述供试品溶液，按上述色谱条件，在0，2，4，6，8，12，24小时，分别测定1次，进样10μl，考察CDCA峰面积。
重复性实验：取鸡胆汁分散片20片(批号：20040702)，精密称取总重量；研细；精密称取1片药剂含量，共5份。
供试品含量测定：分别取鸡胆汁分散片(批号：20040701、20040702、20040703)10片，精密称取总重量；研细；精密称取1片量，按标准品制备方法同法制备供试品溶液，并按上述色谱条件，吸取供试品溶液10μl进样测定，按峰面积外标法计算牛磺鹅去氧胆酸钠含量。
回收率实验：取已知含量的样品(批号：20040702)20片，精密称取总重量；研细；精密称取分别为0.5片量的70%、100%和130%的样品，各精确加入等量的对照品0.245mg；按标准品溶液制备方法同法制备供试品溶液，测定三组平行样。
结果
空白干扰试验：供试品溶液及空白对照溶液各20μl，注入色谱仪，同法测定，结果在CDCA峰相应位置上，空白对照无干扰。
牛磺鹅去氧胆酸钠最低检出限为0.08648μg；牛磺鹅去氧胆酸钠最低定量限为0.17296μg。
线性关系：以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标。回归方程为：Y=1.77965×102X+23.40，r=0.99999。实验结果表明，牛磺鹅去氧胆酸钠进样量在1.162～46.48μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，近似为一通过原点的直线。因此，采用外标一点法测定。
精密度：牛磺鹅去氧胆酸钠峰面积的RSD为0.71%(n=8)。
稳定性：在0、2、4、6、8、12、24小时，CDCA峰而积的RSD为0.3%(n=7)。结果表明，供试品溶液在24小时内稳定。
重复性：5次平行样品的含量的RSD)均为1.2%。
供试品含量测定结果：批号为2004070l、20040702、20040703鸡胆汁分散片。牛磺鹅去氧胆酸钠(C26H44NNaO6S)的含量分别为34.13mg、33.81mg和33.63mg；RSD分别为0.56%、0.835%和0.79%(n=3)。
回收率：平均回收率为100.6%，RSD为0.45%(n=9)。
结论
我们采用PLC法测定鸡胆汁分散片中主要成分牛磺鹅去氧胆酸钠含量，以主要成分牛磺鹅去氧胆酸钠的含量作为控制鸡胆汁分散片的质量标准。本法作为控制鸡胆汁分散片的质量标准方法简便、可靠，样品检测结果准确，精密度及重复性高，回收率为100.6%。可作为质量标准，用于控制药品生产。
参考文献
1 中国药典2005年版.二部.附录XIXA：28-30.
2 张启明,殷晓建,严克东，等.高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量.药物分析杂志，1993，13(5)：321-323.