研究叉头转录因子O1(FoxO1)过表达对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)细胞外基质(ECM)蛋白分泌的影响及其作用机制。

以含组成性激活突变型(CA)FoxO1编码序列的慢病毒载体(LV–CA–FoxO1)及空慢病毒载体(LV–NC–GFP)转染MCs。实验分4组：正常糖(5.6 mmol/L)组(NG组)，高糖(25 mmol/L)组(HG组)、高糖＋LV–CA–FoxO1组(LV–CA组)、高糖＋空病毒载体组(LV–NC组)。各组培养72 h后，实时荧光定量PCR(Real–time PCR)检测FoxO1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、转化生长因子β1(TGF–β1)和TGF–β Ⅰ型及Ⅱ型受体(TGF–βRⅠ/Ⅱ)mRNA的表达水平；Western印迹法检测FoxO1、磷酸化FoxO1(p–FoxO1)、TGF–β1、TGF–βRⅠ/Ⅱ的蛋白表达；细胞免疫荧光化学检测TGF–βRⅠ在细胞内表达分布。

(1)FoxO1表达及活性改变：HG组FoxO1 mRNA及蛋白表达与NG组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)，p–FoxO1蛋白表达高于NG组(P<0.05)；与HG组相比，LV–CA组FoxO1 mRNA与蛋白表达水平均高于HG组(mRNA：为17.36±1.13比1.01±0.12，蛋白：4.38±0.09比0.93±0.10，均P<0.05)，p–FoxO1/FoxO1低于HG组(P<0.05)，FoxO1表达增加，转录活性增强。(2) ECM蛋白分泌改变：HG组FN、Col Ⅰ及Col Ⅳ mRNA表达高于NG组(均P<0.05)，LV–CA组FN、Col Ⅰ及Col Ⅳ表达低于HG组(均P<0.05)。(3) TGF–β传导通路激活改变：HG组TGF–β1、TGF–βRⅠ/Ⅱ表达均高于NG组(均P<0.05)，而LV–CA组上述指标均低于HG组(均P<0.05)；细胞免疫荧光化学结果提示，LV–CA组TGF–βRⅠ在细胞内分布与HG组相比减少。LV–NC组上述指标与HG组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。

FoxO1能够抑制TGF–β传导通路的激活，从而减少MCs在高糖诱导下过度分泌ECM蛋白。